Рпга титр 1 20 что значит. Сифилис рпга (реакция пассивной гемагглютинации), титр. Источники и причины ошибок при постановке, ложноположительные и ложноотрицательные результаты
Очень часто пациенты выходят из кабинета с квадратными глазами, разглядывая кучу бланков на сдачу анализов в руках. Общий анализ крови и анализ мочи вопросов не вызывают, зато все остальные!
Например, кровь на РПГА. Что это за странные буквы? Для чего берут "лишнюю" кровь, когда уже все ясно?
Это только пациенту кажется, что все понятно, а врачу для того, чтобы поставить диагноз, нужен именно этот анализ.
Что это за хитрый анализ?
Если дали направление с этими странными буквами в бланке "на РПГА", что это будет обозначать? Это исследование не назначается при обычной диагностике.
Анализ очень специфический. Делается, чтобы определить стадию сифилиса. В том случае, когда общепринятый анализ на RW - реакцию Вассермана - оказался положительным, или доктор сомневается, что его показатель достоверный. Врачу требуются значения РПГА, чтобы назначить адекватную терапию.
В чем сущность РПГА?
Для тех, кто хочет узнать подробнее о том, РПГА - что это, мы даем ответ. Это специфический трепонемный тест. Если говорить медицинским языком, не совсем понятным простым обывателям, - реакция пассивной гемагглютинации.
В ее основу легло то, что агглютинация эритроцитов, на поверхности которых нашел приют возбудитель сифилиса, называемый или спирохетой, происходит с образованием трепонемных антител.
Агглютинация - процесс, при котором из состава взятой на анализ крови под воздействием специальных реактивов выпадает осадок из каких-либо бактерий, вирусов и прочих инородных включений.
Чем больше оседает эритроцитов с внедрившейся в них трепонемой, тем выше стадия заражения.
Что такое сифилис?
Даже столкнувшись с таким заболеванием, как сифилис, не все могут понять, насколько оно серьезно и чем чревато.
Это венерическая болезнь. Заразиться можно:
- через слюну;
- через влагалищный секрет;
- через сперму;
- бытовым путем при наличии повреждений на поверхности кожи;
- ребенку может передаться сифилис через молоко больной матери.
На первой стадии заражения болезнью появляются шанкры - плотные образования или язвы, затем они исчезают.
Вторичная стадия характеризуется сыпью и увеличением лимфатических узлов.
Третья и четвертая стадии этой неприятной болезни могут выразиться в поражении головного мозга, сердечно-сосудистой системы, костных разрушениях и прочих патологических изменениях в организме.
Если у беременной женщины сифилис, то дети рождаются с острыми патологиями, которые касаются практически всех жизненно важных систем.
Если врач назначил сдать кровь на РПГА, что это такое, можно уточнить для общего развития, но отмахиваться от такого серьезного анализа нельзя! Сифилис требует обязательного лечения.
Те, кто имеют это заболевание, представляют серьезную опасность для окружающих.
Экспересс-диагностику заболевания - реакцию Вассермана или RW - обязательно делают всем, кто устраивается на работу или попадает на лечение в стационар.
Как прочитать результаты анализа?
Анализ сдан, и на руки выдали бланк с непонятными цифрами. Например, РПГА - 1/320. Что это может обозначать?
Цифры пишутся на бланке в том случае, если в организме обнаружена Если ее нет, то там будет написано слово "отрицательно". Значит, заболевание отсутствует, даже если реакция Вассермана была положительной.
РПГА показывает заболевание не ранее чем через 4 недели после внедрения трепонемы в организм, то есть после окончания инкубационного периода.
Цифры значения - это титры.
Анализ РПГА положительный еще будет долгие годы после того, как сифилис излечен.
Это интересно
Тема специфическая, но и сифилис - инфекция непростая. Страх заразиться им может отравить жизнь. Положительный РПГА и RW так выбивают из колеи, что некоторых особо нервных пациентов это заставляет задумываться о самоубийстве.
Не нужно сразу впадать в панику! Например, реакция Вассермана может показать наличие сифилиса во время беременности, при ангине и некоторых других заболеваниях. Именно для уточнения того, есть ли болезнь, и берут дополнительные анализы, один из которых - РПГА - анализ крови, который точно показывает, есть ли трепонема в организме, и какая стадия у заболевания.
Но и это исследование может оказаться неточным при некоторых воспалительных заболеваниях внутренних органов. Ложноположительный РПГА - что это может означать, кроме сифилиса? Например, острое воспаление селезенки.
Поэтому получив на руки первичные результаты, не нужно паниковать. Есть вероятность, что после повторной сдачи крови результат окажется отрицательным.
Если несколько специфических анализов крови на сифилис показывают положительный результат, только тогда заражение считается 100%.
Поэтому и проводят комплексное обследование. Оно состоит из:
- реакции Вассермана;
- РПГА;
- ИФА - иммуноферментного анализа;
- РИБТ, который выявляет сифилис при отсутствии внешней симптоматики на поздних стадиях.
К сожалению, сифилис - такая болезнь, которой можно заражаться несколько раз. Иммунитет после перенесенного заболевания не появляется.
РПГА анализ – методика, являющаяся одной из наиболее важных среди прочих исследований крови. С помощью неё можно определить развитие неприятных болезней кишечно-инфекционного характера. Но зачастую анализ используется для выявления сифилиса. Исследование имеет высокую точность, достоверность.
РПГА расшифровывается, как реакция пассивной гемагглютинации.
РПГА основана на феномене агглютинации эритроцитов, у которых на поверхности адсорбируются антигены — реагенты РПГА, когда к ним прибавляется сыворотка крови больного сифилисом.После соединения сыворотки заражённого сифилисом к реагенту РПГА протекает агглютинация (присоединение или склеивание) эритроцитов и их выпадение в осадок. Степень склеивания зависит напрямую от скопления и плотности антител в сыворотке крови, по этой причине РПГА помогает не только выявить наличие антител, но и опознать их количество.
Подразделяют результат на первичное и вторичное инфицирование, выражающееся в проявлении различных антител. При первичном активизируются IgM, при вторичном – IgG. Точность исследования ко второй фазе становится ещё более специфичной. Если на первой фазе она составляет около 96%, то на второй может доходить до 99%.
Анализ хорош в качестве самостоятельного исследования, но лучше употреблять его в качестве подтверждающего метода после положительного неспецифического исследования.
Благодаря своей высокой точности данный анализ всё чаще применяется для подтверждения или опровержения начала поражения больного сифилисом.
Так же, для большей достоверности, после проведения РПГА можно провести другой подтверждающий тест, к примеру, «трепонемный» иммуноферментный.В целом диагностику всегда проводят комплексно, не пользуясь только лишь 1 видом обследования, а комбинируя различные дополняющие друг друга методы.
Задайте свой вопрос врачу клинической лабораторной диагностики
Анна Поняева. Закончила нижегородскую медицинскую академию (2007-2014) и Ординатуру по клинико-лабораторной диагностике (2014-2016).
Небольшим минусом или, скорее, особенностью анализа является его чувствительность даже после излечения болезни. Результат держится положительным в течение всей жизни переболевшего сифилисом человека. По этой причине РПГА не используется для диагностики болезни раннего или позднего периодов. Так же нельзя с помощью данного анализа выявить эффективность проводимого лечения.
При любом положительном результате существует подозрение на заражение инфекцией. Но периодически может случаться проявление ложноположительной реакции. Правда, её количественное присутствие обычно не превышает 3% и обуславливается рядом причин неинфекционного характера.
В любом случае анализ следует подтверждать проведением других дополнительных исследований.Посмотрите видео на эту тему
Как проводится исследование
Кровь забирается обычным способом из вены.
Сифилис – заболевание инфекционной природы, обусловленное спирохетой Treponema pallidum, склонное к прогредиентному хроническому течению, с чёткой периодизацией клинической симптоматики.
Преобладание полового пути передачи над контактным и трансплацентарным ставит это заболевание в ряд венерических (ЗППП, ИППП). Помимо указанных способов передачи инфекции особую роль играет артифициальный путь (от лат. «artificio» - искусственно созданный).
Он характерен для медицинских учреждений, в основном, реализуется в условиях стационара. Инфицирование происходит при гемотрансфузиях, различных хирургических операциях, инвазивных диагностических методах.
Несмотря на карантинизацию донорской крови, проблема выявления сифилиса у доноров на разных стадиях заболевания все ещё актуальна.
Поэтому диагностические мероприятия при сифилисе требуют стандартизации, внедрения новых чувствительных и информативных методов идентификации, а также сведения к минимуму ошибок и неправильной трактовки результатов анализов.
- 1 Скрининг и диспансеризация групп населения (в том числе и беременность, постановка на учет в женской консультации, поступление на работу и оформление медкнижки и так далее).
- 2 Скрининг в группах риска (незащищенные половые контакты с человеком, инфицированным сифилисом, лица после принудительных сексуальных контактов, ВИЧ-инфицированные и так далее).
- 3 Лица, имеющие симптомы заболевания, или лица с подозрением на сифилитическую инфекцию.
- 1 Идентификация Treponema pallidum в тёмном поле (темнопольная микроскопия).
- 2 Заражение подопытных животных (культивирование в лабораторных животных).
- 3 ПЦР (полимеразно-цепная реакция).
- 4 ДНК-зонд или гибридизация нуклеиновых кислот.
- 1
Нетрепонемные тесты:
- Реакция Вассермана (РСК);
- Реакция микропреципитации (МР, РМП) и ее аналоги, которые приведены ниже;
- Тест быстрых плазменных реагинов (RPR, РПР);
- Тест с красным толуидином и сывороткой (TRUST);
- Нетрепонемный тест Лаборатории исследования венерических болезней - VDRL.
- 2
Трепонемные тесты:
- Р-ция иммобилизации Treponema pallidum – РИБТ/РИТ;
- Р-ция иммунофлюоресценции – РИФ, FTA (разведения сывороток РИФ-10, РИФ-200, РИФ-абс);
- Р-ция пассивной гемагглютинации (РПГА, ТРПГА, TPHA);
- Иммуноферментный анализ (ИФА, EIA);
- Иммуноблоттинг.
- 1 Минимальная чувствительность в стадии сифилиса первичного – 70%;
- 2 Минимальная чувствительность в стадии сифилиса позднего – 30%;
- 3 Возможность появления ложноотрицательных и ложноположительных результатов;
- 4 Трудоёмкость выполнения РСК.
- 1 Относительно маленькая стоимость производства тестов;
- 2 Получение быстрого ответа;
- 3 Возможность их применения для скрининга.
- 1 Нарушение технологии выполнения, при блокировании комплекса АГ-АТ.
- 2 Наличие у больного аутоиммунных заболеваний (ревматоидный артирит, ревматизм, склеродермия, системная красная волчанка, саркоидоз и др.).
- 3 Злокачественные новообразования.
- 4 Вирусные и бактериальные инфекции.
- 5 Эндокринные заболевания (аутоиммунный тиреоидит, сахарный диабет).
- 6 Беременность.
- 7 Употребление алкоголя.
- 8 Приём жирной пищи.
- 9 Старческий возраст.
- 1 сравнительно высокая чувствительность;
- 2 сравнительно высокая специфичность;
- 3 легкость выполнения;
- 4 малая стоимость реактивов;
- 5 получение быстрого ответа.
- 1 От 0 до 20 - отрицательная проба.
- 2 От 21 до 50 - слабоположительная проба.
- 3 От 50 до 100 - положительная реакция.
- 1 Максимальный ответ (резко положительная проба) обозначается с помощью 4-х крестов.
- 2 Положительная проба обозначается с помощью 3-х крестов.
- 3 Слабоположительную реакцию обозначают двумя крестами.
- 4 Один крест свидетельствует о сомнительном и отрицательном результате.
- 5 Отрицательный ответ маркируют знаком «минус».
Показать всё
1. Классификация методов лабораторной диагностики
Диагностика сифилиса имеет некоторые особенности и отличается от диагностики других бактериальных инфекций. Сложное строение и антигенные свойства бледной трепонемы обусловливают ошибки в интерпретации результатов серологических реакций.
Сдать анализ крови на сифилис предлагают 3 основным группам пациентов:
Все лабораторные методы условно подразделяют на прямые и непрямые.
1.1. Прямые методы
1.2. Непрямые методы
Серологические реакции - это методы лабораторной диагностики, базирующиеся на обнаружении антител (сокращенно АТ) к антигенам бледной трепонемы (сокращенно АГ). Они имеют основное значение для подтверждения диагноза.
Рисунок 1 - Алгоритм серодиагностики сифилиса
1.3. Гистоморфологические методы
Эти методы сводятся к выявлению особенностей гистоморфологии сифилитических проявлений. Внимание уделяется тонкостям строения твёрдого шанкра. Однако, дифференциальная диагностика инфекции с помощью гистологии весьма затруднительна. Гистоморфология используется с другими лабораторными и клиническими тестами.
2. Микроскопия Treponema pallidum в тёмном поле
Этот метод основывается на непосредственном обнаружении бледной трепонемы в исследуемом материале с помощью микроскопа и специальных приспособлений (чаще всего отделяемое эрозий и язв, реже спинномозговая жидкость и другие субстраты).
С помощью скарификации, соскоба, сдавливания с эрозий и язвенных дефектов получают экссудат, затем исследуют в микроскоп подготовленный препарат.
Обычно бледные трепонемы выявляют в препарате, полученном из шанкра, из очагов вторичного свежего, вторичного рецидивного сифилиса, а также пунктата лимфоузлов, плаценты.
Основанный на феномене свечения мелких частиц в тёмном поле при попадании луча света (феномен Тиндаля), метод прекрасно позволяет дифференцировать возбудителя сифилиса от других трепонем на основании морфологических отличий и отличий в способах передвижения бактерии.
Для микроскопии используют специальный темнопольный конденсор соответствующего оптического разрешения. Препарат получают способом раздавленной капли (каплю материала наносят на чистое обезжиренное предметное стекло и закрывают очень тонким покровным).
На покровное стекло капают иммерсионное масло. С помощью поворота тубуса и поворота увеличивающей линзы регулируют нужное освещение.
В тёмном поле микроскопа обнаруживаются клетки крови, эпителиальные клетки и сам возбудитель сифилиса. Бледная трепонема выглядит как спираль, очень тонкая, излучающая серебристый цвет, с плавными движениями.
Рисунок 2 - Темнопольная микроскопия как способ визуализации бледной трепонемы в исследуемом материале. Источник иллюстрации - CDC
Treponema pallidum необходимо отличать от других трепонем, в том числе и Tr. refringens, которая может содержаться в ротоглотке и на слизистой половых органов. Эта бактерия совершает хаотичные движения, имеет широкие и несимметричные, довольно грубые завитки. Кроме того, Treponema pallidum отличают от Tr. Microdentium, Tr. Buccalis и Tr. vincenti.
Визуализация бактерий в тёмном поле иногда дополняется реакцией флюоресценции. Для этого меченые флюоресцирующим красителем противотрепонемные АТ добавляют в нативный материал. При этом образуется комплекс, называемый антиген-антитело (сокращенно АГ-АТ), который и является объектом для исследования с помощью люминесцентного микроскопа.
3. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)
ПЦР, разработанная в 1991 году для обнаружения молекулы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) бледной трепонемы, является высокочувствительным и специфичным, позволяет выявить фрагменты ДНК возбудителя.
Базируется данный анализ на копировании коротких участков ДНК бледной спирохеты, который удовлетворяет заданным параметрам и присутствует в образце. Всё это выполняется в искусственных условиях (in vitro). Реакция проводится в приборе - амплификаторе, который обеспечивает периодизацию температурных циклов. Происходит охлаждение с последующим нагреванием пробирок с погрешностью в 0,1˚С.
ДНК-матрицу прогревают в течение 2 минут при температуре 92-98˚С (максимальная температура используется, если полимераза термостабильна). При нагревании цепи ДНК расходятся из-за распада водородных связей между ними. В стадии отжига температуру реакции снижают для связывания праймера с одноцепочечной матрицей.
Отжиг занимает около 30 секунд, в течение этого времени синтезируются сотни нуклеотидов. Вновь синтезируемые молекулы копируются полимеразой, в результате многократно увеличиваются специфические фрагменты дезоксирибонуклеиновой кислоты. Последующая детекция фрагментов проводится с помощью электрофореза в геле агар.
ПЦР-диагностика сифилиса пока носит экспериментальный характер, но оправдана при выявлении врождённой инфекции, в сложных диагностических случаях или при минимальном содержании бледных трепонем в исследуемом материале.
4. ДНК-гибридизация
ДНК-гибридизация выполняется in vitro и основана на полном или частичном соединении двух одноцепочечных молекул ДНК в одну молекулу. В случае полного соответствия комплементарных фрагментов объединение происходит легко. Если комплементарное соответствие частичное, то объединение цепочек ДНК происходит медленно. На основании времени слияния цепей можно оценить степень комплементарности.
При нагреве ДНК в буферном растворе разрываются водородные связи азотистыми основаниями, являющимися комплементарными, в результате цепочки ДНК расходятся. Далее получают препарат из двух денатурированных дезоксирибонуклеиновых кислот. При охлаждении одноцепочечные участки ренатурируют. Образуется так называемый гибрид ДНК.
Метод позволяет оценить и анализировать скорость отжига, учитывая особенности (сходства и различия) ДНК между видами или внутри вида.
Применение ДНК-зонда заключается в гибридизации меченого фрагмента ДНК со специфичным участком ДНК для идентификации комплементарных последовательностей нуклеотидов. Для метки зонда используется группа ненасыщенных атомов (хромофоры) или радиоактивные изотопы.
ДНК–зонд применяют для гетерогенного и гомогенного детектирования нуклеиновых кислот. Роль зонда заключается в определении участков, на которых произошло слияние мишень-зонд. Детектирование в гомогенной системе имеет преимущество - позволяет отследить гибридизацию молекул ДНК в реальном времени.
Суть метода сводится в денатурации ДНК и ренатурации (воссоединения цепочек ДНК). Процесс ренатурации нуклеиновой кислоты и ДНК-зонда заканчивается образованием «гибрида».
Специфические последовательности нуклеиновых кислот гибридизуются с ДНК–зондом и, таким образом, выявляются и позволяют оценить количество ДНК в исследуемом материале.
5. Заражение лабораторных животных
Высокая чувствительность кроликов к Treponema pallidum (порядка 99,9%) позволяет применять их в диагностике сифилитической инфекции.
Заражение кроликов проводится в научно-исследовательских центрах и является «золотым стандартом» оценки чувствительности других методов.
Вернёмся к трепонемным и нетрепонемным тестам, так как они используются чаще всего. Рассмотрим их преимущества и недостатки, а также ошибки в интерпретации результатов.
6. Нетрепонемные тесты
Это тесты определения антител IgG и IgM к стандартизированному кардиолипиновому антигену. Их существенным недостатком является сравнительно небольшая специфичность.
Низкая стоимость и простота выполнения позволяют отнести эти тесты к отборочным диагностическим, необходимым для установки предварительного диагноза и скрининга среди населения.
Именно нетрепонемные тесты сдаются при оформлении медицинской книжки, устройстве на работу, постановке на учет в женской консультации.
Недостатки:
Преимущества:
Получение ложноположительных или слабоположительных проб возможно в следующих случаях:
Как видно из списка, существует достаточно причин для неверного результата. Поэтому к нему следует весьма настороженно относиться. Рассмотрим наряду с РСК ещё две пробы. Это реакция микропреципитации и VDLR (ее модификация).
7. Реакция связывания комплемента (РСК, Вассермана, RW)
Это проба, основанная на способности комплемента связываться с комплексами АГ-АТ. Идентифицируют образовавшийся комплекс с помощью гемолитической системы. Кардиолипиновый антиген заметно повышает чувствительность пробы.
Чувствительной является и реакция Колмера, которая заключается в выполнении при различных температурных режимах. Так, первая фаза реакции Колмера протекает при температуре 20˚С в течение получаса, вторая фаза при тепературе 4-8˚С на протяжении 20-ти часов. За это время происходит связывание комплемента.
При выполнении РСК возможно получение резко положительных результатов. Причиной, вероятно, является большой титр антител в неразведенной сыворотке. В этом случае пробы ставят с уменьшающими дозами.
Для дифференцировки стадий сифилиса и оценки эффективности противосифилитического лечения определяют количество АТ в сыворотке.
Позитивность пробы оценивают с помощью крестов, также в реакциях Вассермана, Колмера и Канна указывается разведение сыворотки.
8. Реакция микропреципитации
Так как трудоёмкость выполнения вышеуказанных проб велика, то для широты обхвата диспансеризацией разных групп населения разработан ускоренный способ серодиагностики сифилиса, так называемый экспресс-метод – реакция микропреципитации (сокращенно МР, РМП).
Она выполняется с кардиолипиновым антигеном и вспомогательными веществами. Его преимуществом является забор периферической крови для исследования. Это значительно ускоряет и саму методику, и работу лаборантов.
Рисунок 2 - Реакция микропреципитации (схема)
Для проведения МР необходимы плазма или инактивированная сыворотка крови пациента (именно они содержат антитела). Далее плазму помещают в маркированные лунки. Затем, к исследуемому материалу добавляют каплю кардиолипинового антигена, смешивают и встряхивают. В итоге в сыворотке инфицированного появляются характерные хлопья, разные по степени интенсивности.
Это качественная проба. При количественной оценке используются 10 разведений сыворотки, помещаемой в 10 лунок с соответствующей маркировкой. При качественной МР ответ указывается в виде крестов (плюсов) или минуса, при количественной указывается титр антител (1:2, 1:4 и так далее).
Наличие хлопьев расценивается как положительный или слабоположительный ответ. Возможно появление флокулята и при отсутствии заболевания, поэтому окончательную оценку полученного результата проводят после контрольного исследования или проведения других реакций (РИБТ, РИФ, ИФА, РПГА).
9. VDRL
Рекомендованный Всемирной организацией здравоохранения метод постановки реакции с антигеном липоидной природы (АГ) по праву считается лучшим среди других стандартных нетрепонемных тестов. Разработан в США, штате Джорджиа в лаборатории венерических болезней (Veneral Diseases Research Laboratories).
Аббревиатура учреждения послужила названием для пробы – VDRL. VDRL - это модификация МР. Сыворотку от больного сифилисом инактивируют и помещают на предметное стекло. Используемый антиген состоит из кардиолипина, холестерина и лецитина в разном процентном соотношении. Ответ регистрируется практически сразу.
Отчётливая флокуляция возникает в присутствии в сыворотке антител. Сыворотка становится реактивна по прошествии 4-х недель после заражения. Для оценки количества антител, сыворотку предварительно разводят в геометрической прогрессии.
Преимущества VDRL:
Недостатком VDRL является относительно высокая частота ложноположительных результатов.
Их причинами являются всё те же перечисленные выше заболевания.
Трепонемные тесты исполняются со специфическими АГ Treponema pallidum. Они необходимы и обязательны для установления окончательного диагноза. Это реакция иммунофлюоресценции (РИФ), реакции непрямой гемагглютинации (РПГА), иммуноферментный анализ (ИФА) и др.
После положительного результата нетрепонемного теста (RPR, MP, VDRL) всегда должны выполняться трепонемные (чаще комбинация - РПГА, ИФА, РИФ).
Трепонемные тесты более сложны в исполнении, чем экспресс-тесты, и требуют больших затрат денежных средств.
10. РИФ
Данная реакция (сокращенно РИФ) используется для диагностики сифилиса, в том числе и скрытых форм, и перепроверки положительных и ложноположительных проб.
РИФ основана на свечении меченых антител при соединении с комплексом антиген-антитело под кварцевой лампой. Метод начал применяться в 60-х годах и отличался простотой выполнения и высокой специфичностью (которая немного уступает РИБТ).
Он имеет несколько модификаций: РИФ-10, РИФ-200 и РИФ-abs.
Наиболее чувствительна РИФ в разведении 10 раз, а остальные - более специфичны. РИФ проводится в двух фазах. К АГ добавляют сыворотку крови пациента. Образуется комплекс АГ-АТ, который исследуется в следующей фазе. Далее меченный с помощью флюоохрома комплекс идентифицируют при микроскопии. Если не наблюдается свечение, это указывает на отсутствие специфических АТ в сыворотке крови.
РИФ-200 является наиболее ценным из всех разведений. Метод предназначен для диагностики различных форм сифилиса, особенно скрытого сифилиса и перепроверки положительных проб.
11. РИБТ
Реакция иммобилизации бледных трепонем (сокращено РИБТ, РИТ) одна из сложных серологических проб, требующих значительных усилий и финансовых затрат. РИБТ применяют все реже, но актуальность ее сохраняется в диагностике скрытого сифилиса.
Большое значение она несёт в распознавании ложноположительных результатов у беременных женщин и основывается на иммобилизации бактерий в присутствии иммобилизинов – поздних антител.
Результат оценивается на процентном количестве (%) иммобилизированных трепонем с помощью специальной таблицы:
Ложноположительные результаты также возможны при применении РИБТ. Так, неверный ответ возможен при инфицировании тропическими трепанематозами, а также, при туберкулёзе, циррозе печени, саркоидозе и пациентов старческого возраста.
12. РПГА
Этот анализ крови на сифилис называется реакцией пассивной гемагглютинации (сокращенно, кровь на РПГА, ТРПГА).
Антиген для РПГА приготавливают из эритроцитов барана, покрытых фрагментами бледных трепонем (полученных от инфицированных кроликов (см. рисунок 4)). Для анализа используется венозная кровь (плазма или инактивированная сыворотка) пациента.
При добавлении антигена в сыворотку пациента с сифилисом происходит образование комплекса АГ-АТ, который приводит к агглютинации эритроцитов. агглютинация определяется субъективно врачом-лаборантом.
Рисунок 3 - Схема РПГА (реакция пассивной гемагглютинации)
Проба оценивается как положительная при появлении агглютинатов равномерной розовой окраски. Окрашивание преципитата в красный свидетельствует об осаждении эритроцитов. РПГА является высокочувствительной и высокоспецифичной.
12.1. Реакция микрогемагглютинации
Она является упрощённым вариантом РПГА. Отличается от пробы, описанной выше, меньшим количеством антигена, разбавителя и сыворотки крови для выполнения реакции. Через 4 часа после инкубации сыворотки можно оценить пробу. Используется при скрининговых и массовых обследованиях на сифилис.
13. Иммуноферментный анализ
Иммуноферментный анализ (сокращенно ИФА) базируется на специфической реакции антиген-антитело. Биологический материал (сыворотка крови пациента, ликвор) вносят в лунки, на твердой поверхности которых фиксированы антигены бледной трепонемы. Исследуемый материал инкубируют, затем отмывают антитела, не связавшиеся с антигенами (см. рисунок 5).
Идентификация полученного комплекса осуществляется на этапе ферментации с помощью иммунной сыворотки, меченной ферментом. При химической реакции фермент окрашивает полученные комплексы. Интенсивность окрашивания зависит от количества специфических антител в крови пациента и фиксируется спектрофотометром.
Рисунок 4 - Схема ИФА (иммуноферментного анализа)
Чувствительность ИФА составляет более 95% . Метод используется в автоматизированном режиме для исследования декретируемых групп населения: доноров, беременных и других, для уточнения диагноза при положительных и ложноположительных нетрепонемных тестах.
14. Иммуноблоттинг
Иммуноблоттинг – высокочувствительный метод, модификация простого ИФА. Реакция основана на электрофорезе с разделением антигенов бледных трепонем.
Разделенные иммунодетерминанты переносят на нитроцеллюлозную бумагу и проявляют в ИФА. Далее инкубируют сыворотку и смывают не связавшиеся антитела. Полученный материал обрабатывают иммуноглобулинами (IgМ или IgG), меченными ферментом.
15. Клиническая оценка результатов лабораторной диагностики сифилиса
В таблице 1 ниже мы привели возможные результаты анализов и их расшифровку. Как можно видеть в таблице, основное значение при расшифровке имеет комплексная оценка тестов.
Таблица 1 - Расшифровка результатов серологических реакций (анализов крови на сифилис). Для просмотра кликните по таблице
Оценка реактивности тестов выполняется также «крестами»:
Проблема оптимизации лабораторной диагностики сифилиса не потеряла свою актуальность до настоящего времени. Современные методы диагностики, несмотря на стремление учёных привести диагностику к максимально высоким показателям чувствительности и специфичности, требуют контрольной проверки и индивидуального подхода.
Особенностью сифилитической инфекции является феномен серорезистентности, который так и не получил научного объяснения. Диагноз выставляется после полноценного обследования больного эпидемиологическими, клиническими, лабораторными методами.
На фоне экономико-технического развития медицины наблюдается и прогресс в разработке новых критериев диагностики сифилиса. Всё это позволит быстро, успешно и безошибочно лечить пациентов.
Диагностика сифилиса – крайне важная задача для врачей-инфекционистов, поскольку для определения масштабов распространенности заболевания полное обследование пациентов не проводится. Это требует больших финансовых и временных затрат, к тому же клинические методы часто неинформативны. На сегодняшний день медицина располагает современными способами диагностики. На данный момент в лабораторной практике широко распространены так называемые экспресс-тесты, основанные на определении в крови сифилитических антител. К ним относятся РМП (реакция микропреципитации) и РПГА (реакция пассивной гемаглютинации).
Реакции на разных стадиях заболевания
Treponema pallidum - возбудитель сифилиса
Сифилис – длительно протекающее венерическое заболевание, характеризующееся стадийностью течения и способностью поражать абсолютно все органы и ткани человека. Возбудителем является микроорганизм Treponema pallidum – бледная трепонема.
Источник инфицирования – больной человек.
Исходя из путей заражения сифилисом (половой, контактно-бытовой, гемотрансфузионный, трансплантационный и трансплацентарный), экспресс-тесты могут быть назначены:
- после случайного полового контакта с необследованным партнером;
- если лечащему врачу становится известно о факте заражения кого-либо из членов семьи, полового партнера обследуемого человека;
- если пациенту недавно проводились переливания цельной крови или пересадка органов;
- в случае обнаружения возбудителя заболевания у родившей матери.
В соответствии с принципами действия, на которых основаны реакции пассивной гемагглютинации и микропреципитации, на каждой стадии течения сифилисаэ ффективным будет определенный тест.
| Стадия | Описание | Изображение |
| Первичная | Основной диагностический критерий – наличие твердого шанкра. Он является своеобразным индикатором, позволяющим определить входные ворота инфекции. В случае, когда он возникает в области гениталий, следует судить о половом пути проникновения возбудителя в организм человека. Если твердый шанкр появляется на красной кайме губ – значит, был контакт между здоровым человеком и зараженным. Образование представляет собой безболезненный при пальпации воспалительный очаг (эрозия или язва), располагающийся на плотном основании. Твердые шанкры содержат большое количество бледных трепонем. 3-5 недель спустя в сыворотке крови возникают антитела – соединения плазмы крови белковой природы, препятствующие размножению микроорганизмов. Именно на определении в сыворотки крови специфических антител к сифилису построена большая часть экспресс-методов диагностики. Определение заболевания на первичной стадии развития проводится при помощи реакции микропреципитации |
Твердый шанкр на языке, свидетельствующий о проникновении возбудителя через поцелуй - бытовой путь передачи |
| Вторичная | Характеризуется появлением «ожерелья Венеры», бледно-пятнистой сыпи, возникающей вследствие генерализованного поражения кожных покровов и слизистых оболочек. Возможна локальная потеря волос, вплоть до облысения. На данной стадии болезни пациенты нередко предъявляют жалобы на легкое недомогание, повышение температуры тела до 37,7 °C, появление слабости, насморка, кашля или конъюнктивита. Довольно часто «ожерелья Венеры» нет, а вторичный сифилис практически никак себя не проявляет, способствуя переходу в следующую, хроническую стадию. Серологические реакции также положительны. Для определения заболевания на данном этапе применяется как РМП, так и РПГА |
"Ожерелье Венеры" |
| Третичная | Является самой тяжелой стадией, склонной к рецидивам с длительным течением на протяжении многих лет. Для данного периода характерно развитие гумм – сифилитических гранулем, склонных к некрозу и грубому рубцеванию. Гуммы способны образовываться в любых тканях и органах, в том числе внутренних. Трепонемы обнаруживаются не всегда – серологические реакции положительны примерно в 70% случаев. Наиболее однозначный ответ о наличии антител дает реакция прямой гемагглютинации |
|
Анализ крови на сифилис - реакция Вассермана
РПГА
Реакция пассивной гемаглютинации - один из наиболее специфических и чувствительных серологических методов диагностики сифилиса.
Оценка результата РПГА
Основные характеристики и особенности проведения РПГА указаны в таблице.
| Характеристика | Описание |
| Материал исследования | Образец венозной крови |
| Механизм действия | Реакция непрямой гемагглютинации развивается в случае, если эритроциты – красные кровяные клетки, на поверхности которых располагаются антигены бледной трепонемы, склеиваются при контакте сыворотки крови зараженного сифилисом человека |
| Эффективность | Исследованиями доказано, что по специфичности и чувствительности реакции к возбудителю заболевания данный метод является одним из самых точных серологических анализов |
| При добавлении к исследуемому биологическому материалу сыворотки с антителами к трепонеме наблюдается агглютинация (склеивание) эритроцитов, выпадающих в осадок в виде зонтика. Также на количество агглютинированных эритроцитов влияет концентрация сывороточных антител. Положительная реакция РПГА свидетельствует о присутствии Treponema pallidum в крови обследуемого | |
| Показания для проведения исследования | Лечащий врач назначает сдачу анализа крови на РПГА в следующих случаях:
|
| Чувствительность |
|
| Специфичность | Высокая специфичность (98-100%) дает возможность назначать анализ для подтверждения сифилиса в случае положительной реакции микропреципитации или других аналогичных обследований |
| Ложные результаты | Частота ложноположительных результатов относительно невелика и по данным различных исследователей составляет порядка 0,05-2,5%. Возникновение ложноположительных результатов у лиц, не инфицированных сифилисом, связано со следующими факторами:
|
| Отрицательный результат | Может быть получен в случае, если:
|
Если человек хотя бы раз был болен сифилисом, реакция РПГА будет оставаться положительной в течение всей его жизни.
Для того, чтобы избежать ложноположительных результатов, нужно придерживаться следующих рекомендаций при подготовке к сдаче анализа:
- забор материала проводится строго натощак;
- в день сдачи крови разрешается пить негазированную минеральную воду в минимальном объеме;
- перед проведением анализа на несколько часов следует отказаться от курения и полностью исключить прием алкогольных напитков;
- в случае, если пациент принимает лекарственные препараты, ему надо уведомить об этом своего лечащего врача.
При получении положительного результата показано немедленное обследование членов семьи и половых партнеров инфицированных лиц с целью предотвращения дальнейшего распространения инфекции.
РМП
Реакция микропреципитации (РМП) различной интенсивности
С помощью анализа под названием реакция микропреципитации (РМП) специалист определяет антитела, образующиеся на стадии первичного сифилиса. Титр антител к инфекции выявляется в крови больного уже на 7-10 день после возникновения твердого шанкра.
Характеристики и особенности проведения РМП указаны в таблице.
| Критерий | Описание |
| Материал для обследования | Сыворотка крови, соскоб с поверхностей язв и эрозий, жидкость из лимфоузлов |
| Чувствительность | Колеблется в диапазоне 80-95%, зависит также от стадии заболевания |
| Расшифровка и положительный результат | К исследуемому образцу крови добавляют антиген - фосфолипид кардиолипин, получаемый из бычьего сердца. Сифилис-неспецифические антитела образуют реакцию с липидом. Положительный результат свидетельствует о наличии Treponema Pallidum или сходных возбудителей в исследуемом материале. Интенсивность проведенной реакции (от 1 до 4) указывает на степень заражения |
| Эффективность | Преимущество метода РМП в том, что он позволяет диагностировать сифилис на начальном этапе инфицирования |
| Показания для назначения исследования | Анализ сдают в следующих случаях:
|
| Ложноположительный результат | Возникновение ложноположительных результатов возможно в следующих случаях:
|
| Отрицательный результат | Свидетельствует об отсутствии заболевания, либо возможен в первые несколько дней, когда титра антител еще нет |
Так же, как и в случае РПГА, для исключения ложноположительных результатов, перед тем как сдать анализ, необходимо:
- перед забором крови рекомендуется пить строго негазированную, несладкую воду;
- накануне сдачи анализа исключить употребление жирной, острой и жареной пищи;
- ни в коем случае не употреблять алкоголь;
- избегать повышенных физических и эмоциональных нагрузок;
- при наличии лекарственного средства, которое пациент вынужден принимать в связи с какой-либо терапией, следует предупредить врача, направившего на данное обследование.
Реакция микропреципитации – один из первых анализов, назначаемых для диагностики заболевания. Для получения более точных данных назначается аналогичное исследование, например, РПГА.
В любом случае расшифровка анализов оценивается в сочетании с результатами основного клинического обследования.
Многие пациенты неоднократно задавались вопросом: «Анализ крови РПГА – что это такое?» Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) – такое исследование, которое помогает определить наличие в организме возбудителя, способного провоцировать сифилис. Данный анализ предоставляет достоверные результаты и помогает начать своевременную терапию, которая назначается исключительно специалистом. Для получения качественных результатов рекомендуется соблюдать советы врача. Расшифровкой анализа занимается специалист, поэтому не стоит заниматься самостоятельной диагностикой, так как это может привести к негативным последствиям. Рекомендовано обследование во многих ситуациях.
Значение анализа крови РПГА
Это исследование подразумевает особую реакцию, которая выявляет в организме неактивную гемагглютинацию, помогает вычислить наличие антигенов бледной трепонемы, считающейся контагием сифилиса – опасного заболевания, приводящего к неблагоприятным последствиям, сопровождающегося различной симптоматикой.
В организме она способна спровоцировать определенную реакцию иммунитета, то есть выработку специфических антител. Если после сдачи анализа в крови будут отмечаться положительные результаты, то это свидетельствует о прогрессировании данного организма. Означать это может только одно - срочная терапия.
Серологические исследования бывают:
- специфические;
- неспецифические.
Данное подразделение опирается на разновидности антител, которые можно выявить в крови пациента в результате обследования. В общей сложности, реакция пассивной гемагглютинации – РПГА – специфическое исследование в отношении бледной трепонемы. Установление сифилиса в организме относится к категории специфических диагностик, которые позволяют определить заболевание в любое время его развития.
Иногда РПГА может повлечь за собой ложноположительный результат исследования у пациента. Данная ситуация наблюдается, если у человека развиваются и диагностируются аутоиммунные заболевания и патологии.
Получение ложных результатов теста могут быть спровоцированы из-за вирусных заболеваний, которые увеличивают в человеческом организме неспецифические антитела. Поэтому пациенту могут назначить иные виды исследований для выявления прогрессирующих патологий, а также повторные анализы РПГА.
Необходимость анализа
Так как сифилис – заболевание, которое передается половым путем, анализ РПГА помогает выявить заражение и поспособствует своевременно начатой терапии. Если проигнорировать незащищенный половой акт, то это может привести к серьезным необратимым последствиям и различным половым заболеваниям.
Данное исследование необходимо:
- Для определения наличия сифилиса в организме, так как это заболевание передается не только половым путем, может протекать на начальных стадиях практически бессимптомно.
- Для устройства на работу в различные организации, где сотрудник будет работать с людьми – столовые, больницы, военные организации.
- При постановке на учет в период вынашивания ребенка. В такой ситуации может корректироваться терапия при беременности (т.к. заболевание может привести к различным отклонениям в развитии плода).
- Перед операционным вмешательством и при госпитализации пациента.
- Для доноров крови, чтобы исключить распространение вируса.
- Для людей, которые отбывают срок в местах заключения.
- Для пациентов, у которых существует вероятность прогрессирования сифилиса.
- Для пациентов, у которых скрининговое исследование показало положительный результат.
- После незащищенного полового акта с непроверенным партнером.
- Проводится детям, которые были рождены от зараженной бледной трепонемой матери. В данной ситуации ребенку назначается специальная терапия, которая поможет улучшить его здоровье и избавиться от проблемы.
- Для отслеживания положительных результатов в период активной терапии.
- Для убеждения, что лечение привело к полному излечению пациента.
Анализ крови РПГА – исследование, которое помогает выявить в организме прогрессирование трепонемы – возбудитель сифилиса.
Иные обследования
Сифилис – болезнь, которая требует своевременной диагностики и лечения, если выявить патологии в первые дни после заражения, то существует большая вероятность полного излечения. Если есть сомнения, по поводу заражения, то необходимо обратиться за дополнительной консультацией к дерматовенерологу, который будет курировать лечение, подбирающееся под каждого пациента в отдельности в зависимости от стадии патологии.
Чтобы поставить точный диагноз специалист осматривает пациента, уделяется отдельное внимание половым органам.
При данной патологии будут отмечаться специфические признаки:
- высыпание на половых органах;
- уплотнение кожного покрова;
- увеличение лимфатических узлов.
После этого врач берет материал с поврежденных участков кожи для изучения его под микроскопом. Если специалист обнаружит в исследуемом материале трепонему, то это будет означать, что пациент заражен.
Но стоит помнить, что на некоторых стадиях патологии лабораторные анализы могут показать отрицательный результат, поэтому может потребоваться повторное обследование спустя некоторый период.
- РНГА (реакция непрямой гемагглютинации).
Результаты анализов РПГА
Результат анализа будет готов уже через несколько дней, и пациент сможет узнать свой диагноз (если таковой имеется). Определить заражение можно лабораторным путем только через месяц прогрессирования бледной трепонемы в организме, то есть после первичного инфицирования.
Очень часто первичный анализ характерен для первичной стадии. Что касается вторичной, то заболевание уже сопровождается повышением показаний. При скрытом сифилисе также отмечаются пониженные отметки.
После пройденной терапии, которая будет отличаться между собой в зависимости от стадии патологии, у пациента сохранится положительный результат анализа. Не стоит этому удивляться, так как данная ситуация отмечается у большинства зараженных больных.
Для получения достоверных результатов, необходимо предварительно подготовиться:
- Кровь сдается на голодный желудок в утренние часы.
- Перед тестом не стоит пить большое количество жидкости, так как это может повлиять на кровь. Также компоненты напитков могут оказать свое влияние на результат.
- Стоит отказаться от табакокурения перед прохождением исследования и употребления алкогольных напитков накануне.
Кровь для исследования берется из вены, которая располагается на локтевом сгибе. Если вены находятся слишком глубоко (невозможно взять кровь на анализы), то забор может осуществляться из вен, которые находятся на кисти или в области предплечья.
Необходимо понимать, что если проигнорировать рекомендации специалиста по поводу предварительной подготовки и получить недостоверный результат исследования, то пациенту будет назначено неверное лечение, которое может привести к негативным побочным эффектам и развитию иных патологий в организме, поэтому не стоит рисковать своим здоровьем.