Вакцина чумная для интраназального применения технология приготовления. I. Вакцины. Применение для детей
лиофилизат д/пригот. суспензии для инъекций, накожного скарификационного нанесения и ингаляций: амп. 10 шт. Рег. №: ЛСР-005759/08
Клинико-фармакологическая группа:
Вакцина для профилактики чумы
Форма выпуска, состав и упаковка
Лиофилизат для приготовления суспензии для инъекций, накожного скарификационного нанесения и ингаляций в виде пористой массы серовато-белого цвета.
Вспомогательные вещества: сахароза, желатин, тиомочевина.
80-430 подкожных доз для взрослых - ампулы объемом 2 мл (10) - пачки картонные.
Описание активных компонентов препарата «Вакцина чумная живая »
Фармакологическое действие
Вакцина вызывает развитие иммунитета к чуме длительностью до одного года.
Показания
— профилактика чумы.
Прививкам подлежат дети с 2-х лет и взрослые, проживающее на энзоотичных по чуме территориях, а также лица, работающие с живыми культурами возбудителя чумы.
Режим дозирования
Вакцинацию проводят однократно подкожным, накожным, внутрикожным или ингаляционным способами. Ревакцинацию осуществляют накожным способом через один год, при неблагоприятной эпидемической обстановке -через 6 мес.
Вакцинация накожным, подкожным и внутрикожным способами.
Перед вскрытием каждую ампулу просматривают. Не подлежит применению препарат, целостность упаковки которого повреждена, с измененными физическими свойствами (посторонние примеси, не растворяющиеся хлопья), с истекшим сроком годности, при нарушении режима хранения.
Вскрытие ампул и процедуру введения препарата осуществляют при строгом соблюдении правил асептики и антисептики. Разведенная вакцина, сохраняемая с соблюдением правил асептики, может быть использована в течение 2 ч. Перенос вскрытой ампулы из одного помещения в другое не допускается. Неиспользованную вакцину уничтожают кипячением в течение 30 мин.
Непосредственно перед иммунизацией вакцину разводят 1,8 мл 0,9 % раствора натрия хлорида для инъекций. Препарат должен полностью раствориться в течение 3 мин. Ампулы с вакциной встряхивают. Растворенная вакцина - гомогенная взвесь без посторонних примесей и хлопьев. Полученную взвесь отбирают с помощью стерильного шприца из ампулы и переносят в стерильный флакон, содержащий 0,9 % раствор натрия хлорида для инъекций в объеме, соответствующем таковому, указанному на этикетке коробки для соответствующего способа введения. При этом учитывают объем 0,9 % раствора натрия хлорида, использованного для приготовления исходного разведения.
В зависимости от возраста прививаемых и способа введения используют следующие дозы вакцины.
| Возраст прививаемых | Доза вакцины (количество живых микробных клеток) для введения способом: | |||
| внутрикожным | подкожным | накожным | ингаляционным | |
| 14-60 лет 1) | 1 доза - 300 млн живых микробных клеток (ж.м.к.) в 0,1 мл | 1 доза - 300 млн ж.м.к. в 0,5 мл | 1 доза -5 млрд ж.м.к. в 0,15 мл | |
| Старше 60 лет | 1/3 дозы-100 млн ж.м.к. в 0,1 мл | Не прививают | 1 доза - 3 млрд ж.м.к. в 0,15 мл (3 капли) |
Не прививают |
| 10-13 лет |
112 дозы -150 млн ж.м.к. в 0,1 мл | Не прививают | 1 доза - 3 млрд ж.м.к. в 0,15 мл (3 капли) | Не прививают |
| 7-9 лет | Не прививают | 2/3 дозы - 2 млрд ж.м.к. в 0,1 мл (2 капли) |
Не прививают | |
| 2-6 лет | 1/3 дозы -100 млн ж.м.к. в 0,1 мл | Не прививают | 1/3 дозы - 1 млрд ж.м.к. в 0,05 мл (1 капля) | Не прививают |
| Примечание: 1) женщин, кормящих грудью, прививают только накожно | ||||
Накожный способ.
Вакцинацию проводят на наружной поверхности средней трети плеча следующим образом: взрослым оспопрививательным пером слегка соскабливают (до покраснения) поверхностный слой эпидермиса на 3-х участках кожи, предварительно обработанной 70° этиловым спиртом. Расстояние между участками составляет от 3-х до 4-х см, площадь участка от 1 до 1,5 см 2 . При вакцинации детей эпидермис соскабливают на 1 или 2 участках кожи.
На каждый участок скарифицированной кожи пипеткой наносят по 1 капле вакцины, после чего индивидуальным оспопрививательным пером через каждую каплю вакцины крестообразно наносят 4 горизонтальные и 4 вертикальные линейные насечки длиной 1 см. Затем оспопрививательным пером в течение нескольких секунд тщательно втирают капли вакцины в скарифицированную кожу и дают подсохнуть в течение 5 мин. Насечки следует делать неглубокие, чтобы они не кровоточили (кровь может выступать только в виде мелких росинок). Для каждого прививаемого используют отдельное одноразовое оспопрививательное перо. Запрещается взамен перьев пользоваться иглами, скальпелями и т.п.
Подкожный способ.
Кожу в месте инъекции предварительно обрабатывают 70° этиловым спиртом. Вакцину вводят шприцем ниже угла лопатки или безыгольным инъектором БИ-ЗМ с противоинфекционным протектором ППИ-2 в верхнюю треть плеча позади дельтовидной мышцы.
Внутрикожный способ.
Количество доз и объем растворителя для подростков с 14 лет и взрослых до 60-ти лет указаны на этикетке коробки. Для вакцинации детей в возрасте 10-13 лет объем растворителя при втором разведении удваивают, для вакцинации детей в возрасте от 2 до 9 лет и взрослых старше 60 лет объем растворителя утраивают. Вакцину взрослым и детям вводят в объеме 0,1 мл внутрикожно в область наружной поверхности плеча левой руки после обработки кожи 70° этиловым спиртом с помощью безыгольного инъектора БИ-ЗМ с протектором противоинфекционным ППИ-2 или шприцем объемом 1 мл с тонкой иглой с коротким срезом.
Вакцинация ингаляционным способом.
Вакцинацию проводят в специальных помещениях стационарного или временного типа объемом от 50 до 150 м 3 , высотой от 2,5 до 4,5 м (соотношение длины и ширины не более чем 2:1). Указанные помещения должны быть приспособлены для быстрого проветривания, а стационарные ингаляционные должны быть оборудованы вытяжной вентиляцией.
Вакцину разводят 2 мл стерильного 10% раствора лактозы. Ампулу встряхивают до получения гомогенной взвеси. При обнаружении посторонних примесей, неравномерной взвеси использовать препарат запрещается. Полученную взвесь переносят в стерильный флакон с необходимым для дальнейшего разведения объемом 10% раствора лактозы (согласно указанию на коробке). При этом учитывают объем 10% раствора лактозы, использованный для приготовления исходного разведения. Температура 10% раствора лактозы должна соответствовать температуре, при которой хранился сухой препарат перед разведением.
Полученную микробную суспензию в количестве, определяемом объемом помещения (0,1 мл на 1 м 3 помещения), заливают в резервуар распылителя. Распыление производится с помощью пневматического распылителя эжекционного типа. Распылитель устанавливается вертикально, соплом вверх, в центре помещения на высоте 80-120 см от пола. Распыление производят сжатым воздухом под давлением 1,2 атм до полного израсходования суспензии, залитой в резервуар. Сжатый воздух подается на распылитель до конца сеанса иммунизации. Продолжительность сеанса иммунизации 5 мин. Одна человеко-доза для ингаляционного применения составляет (5±3)х10 6 живых микробных клеток.
Число людей, иммунизированных за один сеанс, определяется из расчета от 1,4 до 2 м 3 помещения на одного человека.
После каждого сеанса иммунизации ингаляционную вентилируют не менее 5 мин. При проведении иммунизации в палатке после каждого сеанса откидывают пологи не менее, чем на 5 мин. Персонал, проводящий вакцинацию, в случае необходимости входа в ингаляционную в течение сеанса и первых 5 мин после его окончания, должен быть одет в специальную одежду (нательное белье, носки, хлопчатобумажный комбинезон, противогаз, тапочки).
Проведенные разными способами прививки регистрируют в установленных учетных формах с указанием наименования препарата, изготовителя, даты прививки, дозы, способа введения, номера серии, срока годности, реакции на прививку.
Побочное действие
Прививки вакциной чумной живой могут сопровождаться как общей, так и местной реакциями, интенсивность которых зависит от метода вакцинации.
Накожная прививка может сопровождаться мелкой везикулярной сыпью по ходу насечек, иногда на месте прививки появляется инфильтрат в толще кожи. Реже наблюдаются регионарные лимфадениты. Указанные симптомы начинают появляться через 8-10 ч после прививки, достигают полного развития через 23-30 ч. Общая реакция возникает на первые сутки и выражается повышением температуры до 37,5°С.
После подкожных и внутрикожных прививок могут наблюдаться местные реакции в виде гиперемии, болезненности, инфильтрата диаметром до 50 мм, реже - увеличение регионарных лимфатических узлов. Местные реакции возникают через 6-10 ч, достигают полного развития через 24-48 ч и исчезают через 4-5 сут. Общая реакция выражается в недомогании, головной боли, повышении температуры до 37,5°С, у одного процента вакцинированных до (38,0-39,0) °С продолжительностью до 3 сут. Иногда наблюдаются тошнота и рвота.
После ингаляционной иммунизации у небольшого числа вакцинированных возможно возникновение недомогания, головной боли, болей в мышцах, повышения температуры до 38,5°С и очень редко до 40°С. Продолжительность реакции 1-3 сут. По времени возникновения наблюдаются два типа реакции: ранние, развивающиеся в первые двое суток и характерные для повторно прививаемых; поздние, появляющиеся на 5-7 сут, и чаще встречающиеся у первично привитых.
Перед массовым применением каждая серия вакцины должна быть испытана на группе людей в 50-100 человек, равнозначной по возрасту и состоянию здоровья основному контингенту прививаемых. Вакцина может быть использована для массовой вакцинации, если количество средних (повышение температуры тела до 37,6-38,5°С) и сильных (повышение температуры тела выше 38,5°С) реакций на ее введение не превышает соответственно 29% и 5% при подкожном методе введения, 1% средних реакций при накожном введении и 6% средних или 4% сильных реакций для ингаляционного метода введения.
Противопоказания
— острые инфекционные и неинфекционные заболевания, хронические заболевания в стадии обострения - прививки проводят не ранее, чем через 1 мес после выздоровления (ремиссии);
— первичные и вторичные иммунодефициты. При лечении стероидными препаратами, антиметаболитами, химио- и рентгенотерапии - прививки проводят не ранее, чем через 6 мес после окончания лечения;
— системные заболевания соединительной ткани;
— злокачественные новообразования и злокачественные болезни крови;
— распространенные рецидивирующие заболевания кожи (при накожной иммунизации);
— хронические заболевания органов дыхания (при ингаляционной иммунизации);
— аллергические заболевания (бронхиальная астма, анафилактический шок, отек Квинке в анамнезе);
— беременность и период лактации.
Беременность и лактация
Противопоказано при беременности и лактации.
Применение для детей
Прививкам подлежат дети с 2-х лет
Лекарственное взаимодействие
Условия отпуска из аптек
Для лечебно-профилактических и санитарно-профилактических учреждений.
Условия и сроки хранения
Хранят в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 0 до 8 °С в недоступном для детей месте. Транспортируют в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 0 до 8°С. Срок годности - 3 года.
Лекарственное взаимодействие
Не допускается введение вакцины чумной живой в сочетании с применением антибиотиков стрептомицинового, тетрациклинового ряда и сульфаниламидов в терапевтических дозах одновременно и ранее, чем через 14 дней после иммунизации.
Допускается одновременная накожная вакцинация взрослых против чумы, бруцеллеза и туляремии на разных участках наружной поверхности верхней трети плеча.
Владельцы патента RU 2510825:
Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения препарата на основе вакцинного штамма чумного микроба. Представленное изобретение предусматривает изготовление посевной нативной культуры чумного микроба, концентрирование микробной суспензии, приготовление вакцинной взвеси и получение сухой формы препарата, при этом приготовление посевной культуры включает культивирование микробов в жидкой питательной среде в бутылях в течение 48 ч при температуре 26…28˚С и непрерывной аэрации не менее 10 л·мин -1 пассированной стабилизированной стартовой культурой, полученной в результате трех последовательных пассажей через организм морских свинок и смешанной в соотношении 2:1 со стабилизирующей глицерино-лактозо-полиглюкиновой жидкостью, при приготовлении вакцинной взвеси используют оптимизированную по компонентному составу защитную среду высушивания, а лиофилизацию проводят соблюдая определенный режим. Представленное решение позволяет получить продукт с повышенной активностью при сокращении продолжительности процесса его изготовления. 3 ил., 6 табл.
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способам получения бактерийных препаратов на основе вакцинных штаммов чумного микроба, и может быть использовано для приготовления медицинских иммунобиологических препаратов.
В настоящее время в России единственным препаратом, используемым для специфической профилактики чумы, является вакцина чумная живая сухая, разработанная в 1937…1939 гг. на основе вакцинного штамма EV линии НИИЭГ [Файбич М.М., Карнеев Р.В., 1947 г.]. Длительное применение вакцины чумной живой сухой показало ее высокую эффективность при накожном, внутрикожном, подкожном и ингаляционном способах иммунизации.
Однако проблема сохранения высокоиммуногенных свойств вакцины во многом определяется стабильностью биологических свойств вакцинного штамма чумного микроба, входящего в ее состав, не только в процессе длительного хранения, но и на технологических стадиях производства препарата. Выпускаемые серии вакцины, как показывает практика, могут различаться между собой по физико-химическим свойствам, содержанию живых микробных клеток, термостабильности, остаточной влажности, иммуногенности и другим показателям. Поэтому поиск новых способов получения чумных вакцин, улучшающих их качественные характеристики, является актуальной задачей на современном этапе.
Известен способ получения вакцины чумной живой сухой на основе штамма EV линии НИИЭГ, применяемый в НИПЧИ г. Ставрополя [Промышленный регламент. Регистрационный номер ФГУН ГИСК им. Л.А. Тарасевича ПР №2334-09]. Способ заключается в последовательном приготовлении из производственной лиофилизированной культуры вакцинного штамма EV посевных культур I…III генерации: I генерации - выращиванием в пробирках на скошенном агаре Хоттингера, II генерации - в матрацах (бутылях) с бульоном Хоттингера или бульоном на основе ферментативного гидролизата казеина (ФГК), III генерации - культивированием в жидкой питательной среде (ЖПС) в бутылях, выращивании нативной культуры на плотной питательной среде (ППС) в АКМ-Ш (реакторе), приготовлении вакцинной взвеси и сухого препарата.
Наиболее близким к заявляемому является способ получения вакцины чумной живой сухой на основе вакцинного штамма EV, применяемого в 48 ЦНИИ Минобороны России [Промышленный регламент на производство вакцины чумной живой лиофилизата для приготовления суспензии для инъекций, ингаляций и накожного скарификационного нанесения. ПР 08461522-07-08. Утвержден 03.06.2009 г. Регистрационный номер ФГУН ГИСК им. Л.А. Тарасевича ПР №2120-09]. Способ заключается в последовательном приготовлении из производственной культуры вакцинного штамма EV посевных культур I…III генерации: I генерации - выращиванием микробов в пробирках на скошенной ППС на основе ферментативного гидролизата мяса крупного рогатого скота (ФГМ), II генерации - ЖПС на основе ФГМ во флаконах, III генерации - культивированием в ЖПС на основе ФГМ в бутылях, выращивании нативной культуры в ЖПС, в аппаратах - культиваторах (реакторах), концентрировании микробной взвеси, приготовлении вакцинной взвеси с использованием защитной среды высушивания следующего состава:
лиофилизации вакцинной взвеси по следующему технологическому режиму:
температура конденсатора - минус (50…70)°C;
температура замораживания материала - минус 30°C;
разрежение в сушильной камере - не более 300 мкм рт.ст;
скорость сушки - 2°С·ч -1 ;
время досушивания -10 ч.
Общим с заявляемым способом является аналогичность получения посевной культуры методом выращивания в ЖПС на основе ФГМ в бутылях и концентрирование микробной взвеси.
Основными недостатками способа-прототипа является следующее.
1. Получение традиционного посевного материала, включающее в себя ряд последовательных пересевов на плотных и в жидких питательных средах (посевные культуры I, II, III генераций), не гарантирующих стабильности основных биологических свойств и значительно снижающих резистентность вакцинного штамма чумного микроба к действию внешних факторов на последующих этапах приготовления концентрированной суспензии, вакцинной взвеси и сухой формы готового препарата.
2. Применение в качестве компонента защитной среды высушивания декстрина, который вследствие процессов коагуляции и дальнейшей седиментации, спровоцированной воздействием высокой температуры при автоклавировании, приводит к искусственному увеличению оптической плотности по сравнению с исходной. Это в дальнейшем способствует неадекватности оценки действительной концентрации, возрастанию оптической концентрации микробных клеток непосредственно в вакцинном препарате. Вышеуказанные обстоятельства ведут к нежелательному снижению одного из важнейших показателей качества вакцины чумной живой - процента живых микробных клеток.
3. Использование традиционного режима высушивания вакцинной взвеси с высокой гибелью микробов в условиях лиофильного стресса.
Все вышеперечисленные недостатки требовали серьезного поиска оптимальной схемы приготовления посевного материала, обеспечивающей стабилизацию основных биологических свойств микробов на ранних стадиях производства вакцины, оптимизации компонентного состава среды высушивания для полной протекции микробных клеток перед лиофилизацией и исключения возможных технических ошибок в определении концентрации микробных клеток на стадии приготовления вакцинной взвеси, отработки режимов лиофилизации, позволяющих снизить повреждающее воздействие низких температур и обезвоживания на микробные клетки в процессе сушки.
Задача изобретения заключается в сокращении продолжительности процесса получения вакцинного препарата с одновременным повышением его специфической активности.
Поставленная задача решается благодаря тому, что в заявляемом способе получения вакцины разработаны и оптимизированы (таблица 1):
1. Схема получения посевной культуры штамма чумного микроба, предусматривающая культивирование пассированной стабилизированной стартовой культуры (ПССК) в ЖПС в бутылях.
Для приготовления ПССК ампулу с эталонной культурой штамма чумного микроба ресуспендируют до первоначального объема в дистиллированной воде, а затем проводят последовательные трехкратные тестикулярные пассажи микробной культуры через организм восприимчивых животных (морских свинок). Пассированную микробную культуру стерильно выделяют из организма животных и смешивают в соотношении 2:1 со стабилизирующей жидкостью (глицерин, лактоза и полиглюкин). Приготовленную ПССК, предназначенную для получения посевной культуры в бутылях, разливают во флаконы по 60…80 мл и хранят в замороженном состоянии при температуре минус 18…22°C.
Культивирование микробов в ЖПС в бутылях проводят в течение 48 ч при температуре 26…28°C и непрерывной аэрации не менее 10 л·мин -1 . По окончании выращивания проводят биологический контроль культуры и передают ее в реактор для приготовления нативной культуры.
Сравнительная характеристика нативных культур вакцинного штамма чумного микроба, приготовленных по заявляемой схеме и схеме-прототипу, представлены в таблице 2.
2. Компонентный состав защитной среды высушивания: лактоза, г·л -1 - 300,0; тиомочевина, г·л -1 - 30,0; аскорбиновая кислота, г·л -1 - 30,0; полиглюкин, г·л -1 - 30,0; дистиллированная вода, л - до расчетного объема, водородный показатель среды в пределах 7,4…7,8 ед. pH (таблица 3).
Полиглюкин (полисахарид-структурообразователь)-отечественный декстран, полученный методом направленного синтеза. Молекулярный вес полиглюкина составляет (50…70)·10 3 ед. Являясь продуктом частичного гидролиза декстрина, он обладает идентичными свойствами, но значительно уступает в молекулярной массе. Полиглюкин химически инертен, практически не вступает в соединение с другими веществами. Безвредность, нетоксичность и апирогенность полиглюкина доказаны длительным и успешным применением его в области гемотрансфузиологии. Отсутствие побочного влияния на организм человека допускает его применение в качестве компонентов среды высушивания для вакцин.
В основе его действия на микробные клетки лежит процесс стабилизации конформационного состояния белковых молекул за счет восстановления внутримолекулярных водородных связей. Использование полиглюкина в качестве криопротектора позволяет значительно снизить деструкцию микробных клеток при замораживании и обезвоживании в процессе лиофилизации.
3. Технологический режим лиофильного высушивания по основным параметрам: температура конденсатора минус 60°C, температура замораживания материала минус 40°C, разрежение в сушильной камере (глубина вакуума) не более 100 мкм рт.ст., скорость сушки 3°C·ч -1 , время досушивания 6 ч (таблица 3, рисунки 1-3).
Сокращение продолжительности процесса получения вакцины, стабилизация биологических свойств чумного микроба на стадиях приготовления вакцинных полуфабрикатов и улучшение качественных характеристик сухой формы препарата обусловлено:
1) схемой получения посевной культуры вакцинного штамма чумного микроба, предусматривающей культивирование ПССК в ЖПС в бутылях;
2) применением оптимизированной по компонентному составу защитной среды высушивания;
3) оптимизированным по основным технологическим параметрам режимом лиофилизации.
Причинно-следственная связь между совокупностями существенных признаков заявляемого объекта и достигнутых результатов представлена в таблице 4.
Изобретение позволяет приготовить вакцину, соответствующую предъявляемым требованиям и обладающую стабильными биологическими свойствами на протяжении всего допустимого срока хранения.
Возможность осуществления заявляемого изобретения показана следующим примером.
Для приготовления посевной культуры чумного микроба хранившуюся при отрицательных температурах ПССК вносят в ЖПС на основе ФГМ в бутылях. Выращивание проводят в течение 48 ч при температуре 26…28°C и непрерывной аэрации не менее 10 л·мин -1 . По окончании выращивания культуры в бутылях проводят ее биологический контроль и передают в реакторы для приготовления нативной культуры. Выращивание микробной взвеси в реакторе проводят методом глубинного культивирования в соответствии с требованиями [Промышленный регламент. Регистрационный номер ФГУН ГИСК им. Л.А. Тарасевича ПР №2120-09].
Для приготовления среды высушивания навеску полиглюкина предварительно заливают 100…200 мл теплой 40…50°C дистиллированной воды и выдерживают 10…12 ч при температуре 18…24°C. Полученный гомогенный раствор фильтруют в стерильную посуду через марлевый фильтр.
Навеску лактозы заливают 500 мл дистиллированной воды и подогревают до 80…90°C при постоянном перемешивании до полного растворения. После этого полученный раствор разделяют на две части. В одной части растворяют аскорбиновую кислоту, а в другой - тиомочевину; растворение тиомочевины проводят при температуре 70…80°C. Раствор аскорбиновой кислоты нейтрализуют 40% раствором NaOH до величины 7,3…7,5 ед. pH. Приготовленные растворы тиомочевины и аскорбиновой кислоты фильтруют через марлевый фильтр и смешивают с раствором полиглюкина. Величина pH полученной смеси должна находиться в пределах 7,2…7,6 ед. pH. Корректировку величины pH производят 10% раствором NaOH.
Для корректировки оптической плотности при приготовлении вакцинной взвеси готовят также дополнительный раствор среды высушивания с содержанием компонентов в 10 раз меньшим, чем их содержание в основном растворе среды высушивания. Полученную среду высушивания стерилизуют в автоклаве (текучим паром - 40 мин; при 120°C - 20 мин или фильтрацией на фильтрующих установках типа "Sartorius" SM 16277 или "Сартокон-мини").
В бутыль с концентрированной взвесью чумного микроба при помощи вакуума добавляют среду высушивания из расчета 2:1 (2 части концентрированной взвеси, 1 часть среды высушивания). Содержимое бутыли тщательно перемешивают встряхиванием. После этого отбирают пробу вакцинной взвеси в количестве 200…300 мл для оценки ее биологических свойств. Вакцинную взвесь можно хранить при температуре 2…6°C не более 4 ч.
Вакцинную взвесь разливают в стерильные пенициллиновые флаконы по 2,0 мл в каждый с помощью автоматического дозатора над пламенем спиртовки.
Сублимационное высушивание проводят в установке TG-16. Для этого за 3 ч до загрузки охлаждают полки камеры до температуры минус 40°C, конденсатор до температуры минус 60°C. Кюветы с флаконами устанавливают на 1-5 полки сублиматора. В один из флаконов на полках №1, 3, 5 вставляют датчик температуры. Замораживание вакцинной взвеси проводят до температуры минус 40°C. После достижения указанной температуры вакцинной взвеси делают выдержку в течение 2 ч. Включают вакуумный насос и создают разрежение в установке не более 100 мкм рт.ст. Через 1 ч после создания заданной величины разрежения включают подогрев полок. Далее проводят постепенное повышение температуры до 0°C. Скорость сушки в этот период составляет 3°C·ч -1 . При достижении температуры в материале 0°C с помощью подогрева полок за 6 ч доводят ее до температуры 25…30°C. Скорость сушки в этот период составляет 5…6°C·ч -1 и досушивание проводят при этой температуре в течение 6 ч.
Сравнительные характеристики экспериментально-производственных серий вакцины чумной живой сухой, наработанных по заявляемому способу и способу-прототипу, а также в процессе длительного хранения представлены в таблицах 5 и 6.
| Таблица 3 | ||
| Сравнительная характеристика стадий технологического процесса получения чумной вакцины | ||
| Наименование стадии технологического процесса | Описание стадии технологического процесса | |
| прототип (Промышленный регламент ПР №2120-09) |
заявляемый объект | |
| ТП - 14 | Состав стабилизатора: | Состав стабилизатора: |
| Приготовление вакцинной взвеси | лактоза, г·л -1 - 300; | лактоза, г·л -1 - 300; |
| декстрин, г·л -1 - 30; | полиглюкин, г·л -1 - 30; | |
| Операция BP-14-5 | тиомочевина, г·л -1 - 30; | тиомочевина, г·л -1 - 30; |
| Приготовление стабилизатора | аскорбиновая кислота, г·л -1 - 30; | |
| вода дистиллированная, л - до расчетного объема. | ||
| ТП-15. Розлив вакцинной взвеси и сублимационное высушивание | Технологический режим сублимационного высушивания по основным параметрам: температура конденсатора - минус 60°C; | |
| Операция ТП-15-8 Сублимационное высушивание | температура замораживания материала - минус 30°C; разрежение в сушильной камере (глубина вакуума) - не более 300 мкм рт.ст; скорость сушки 2°C·ч -1 ; время досушивания 10 ч | температура замораживания материала минус - 40°C; разрежение в сушильной камере (глубина вакуума) - не более 100 мкм рт.ст; скорость сушки 3°C·ч -1 ; время досушивания 6 ч. |
| Таблица 4 | |||
| Причинно-следственная связь между совокупностями существенных признаков заявляемого объекта и достигнутых результатов | |||
| Виды технического результата и их размерность | Показатели фактические и расчетные | Подробное описание, за счет чего стало возможным улучшение показателей предложенного объекта по сравнению с прототипом | |
| прототип | заявляемый объект | ||
| Концентрация микробных клеток, | Использование оптимизированного компонента состава защитной среды высушивания и оптимизированного технологического режима лиофильного высушивания | ||
| млрд·мл -1: общая (по ОСО мутности ГИСК) | 90 | 75 | |
| живых (чашечным методом) | 24,5 | 26,1 | |
| 27,2 | 34,8 | ||
| Иммуногенность ЕД 50 , ж.м.кл., для: | Использование пассивированной стабилизированной стартовой культуры | ||
| белых мышей | 11350 | 9053 | |
| морских свинок | 7360 | 5225 | |
| Сокращение продолжительности процесса получения вакцины, ч | 491 | 337 | Использование пассивированной стабилизированной стартовой культуры и оптимизированного технологического режима лиофильного высушивания |
| Таблица 5 | |||||
| Сравнительная характеристика биологических показателей вакцины чумной живой сухой в процессе длительного хранения (X ¯ ± I 95 , n=5) |
|||||
| Исследуемая серия вакцины | Концентрация микробов, N·10 9 м. кл.·мл -1 , определенная… | Процент живых микробных клеток | Схема получения посевных культур | ||
| по ОСО мутности ГИСК им. Л.А. Тарасевича | Чашечным методом | ||||
| Свежеприготовленная | 75,0±4,0 | 26,1±2,3 | 34,8 | Заявляемая | |
| Хранившаяся в течение… лет | 1 | 75,0±3,0 | 25,7±1,9 | 34,2 | |
| 2 | 75,0±2,0 | 25,4+2,6 | 33,8 | ||
| 3 | 75,0±2,0 | 23,3±2,0 | 31,1 | ||
| Свежеприготовленная | 90,0±2,0 | 24,5+1,3 | 27,2 | Прототип | |
| Хранившаяся в течение… лет | 1 | 90,0±2,0 | 23,8+1,5 | 26,4 | |
| 2 | 90,0±2,0 | 23,2±1,5 | 25,7 | ||
| 3 | 90,0±2,0 | 22,5±1,8 | 25,0 |
| Таблица 6 | ||||
| Характеристика иммунобиологических свойств экспериментально-производственной серии вакцины чумной живой сухой | ||||
| Показатель качества | Единица измерения | Требования НД (Промышленный регламент ПР №2120-09) | Результаты исследований серий препарата, полученных с использованием…способа | |
| заявляемого | прототипа | |||
| Концентрация микробных клеток в 1 мл: | ||||
| по ОСО мутности ГИСК | млрд | От 50 до 100 | 75 | 90 |
| живых | млрд | - | 26,1 | 24,5 |
| Процент живых микробных клеток | процент | 25,0, не менее | 34,8 | 27,2 |
| Препарат должен | ||||
| Специфическая безвредность | - | быть безвредным при подкожном введении морской свинке массой (275±25)г 15×10 9 микробных клеток (м.кл.) в 1 мл по ОСО мутности ГИСК им. Л.А. Тарасевича | Препарат безвреден при подкожном введении морской свинке массой (275±25) г 15×10 9 микробных клеток (м.кл.) в 1 мл по ОСО мутности ГИСК им. Л.А. Тарасевича | |
| Иммуногенность (ЕД 50): | 40000, не более | 9053 | 11350 | |
| для белых мышей | ж.м.кл. | |||
| для морских свинок | 10000, не более | 5225 | 7360 |
Способ получения препарата на основе вакцинного штамма чумного микроба, предусматривающий изготовление посевной нативной культуры чумного микроба, концентрирование микробной суспензии, приготовление вакцинной взвеси и получение сухой формы препарата, отличающийся тем, что приготовление посевной культуры включает культивирование микробов в жидкой питательной среде в бутылях в течение 48 ч при температуре 26…28˚С и непрерывной аэрации не менее 10 л·мин -1 пассированной стабилизированной стартовой культурой, полученной в результате трех последовательных пассажей через организм морских свинок и смешанной в соотношении 2:1 со стабилизирующей глицерино-лактозо-полиглюкиновой жидкостью, при приготовлении вакцинной взвеси используют оптимизированную по компонентному составу защитную среду высушивания, включающую в себя: лактозу, г·л -1 - 300,0, тиомочевину, г·л -1 - 30,0, аскорбиновую кислоту, г·л -1 - 30,0; полиглюкин, г·л -1 - 30,0; дистиллированную воду, л - до расчетного объема, рН среды 7,4…7,8, а лиофилизацию проводят соблюдая следующий режим: температура конденсатора минус 60°С, температура замораживания материала минус 40°С, разрежение в сушильной камере (глубина вакуума) не более 100 мкм рт.ст., скорость сушки 3°С · ч -1 и времени досушивания 6 ч.
Похожие патенты:
Изобретение относится к биотехнологии. Способ получения спорового материала бактерий рода Clostridium предусматривает получение инокулята бактерий в полноценной синтетической питательной среде, засев инокулята и культивирования в подходящих условиях в питательной среде, включающей картофель, глюкозу, сернокислый аммоний и мел.
Изобретение относится к биотехнологии. Предложена ассоциация штаммов бактерий-нефтедеструкторов, выделенных из нефтезагрязненной почвы, Acinetobacter species В-1037, Pseudomonas species В-989, Bacillus species B-1040, депонированных в ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор».
Изобретение относится к области биотехнологии. Штамм Bacillus subtilis subsp.subtilis BKM B-2711D обладает выраженным антагонизмом по отношению к Escherichia coli, Salmonella typhi, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, резистентностью к антибиотикам стрептомицину и тетрациклину.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Вакцина чумная живая ФС.3.3.1.0022.15
В замен ГФ Х, ст. 713
ФС 42-3877-99
Настоящая фармакопейная статья распространяется на вакцину чумную живую, лиофилизат для приготовления суспензии для инъекций, накожного скарификационного нанесения и ингаляций, представляющую собой живую культуру вакцинного штамма чумного микроба Yersinia pestis EV линии НИИЭГ, высушенную методом лиофилизации в стабилизирующей среде.
Вакцина предназначена для профилактики чумы и вызывает развитие специфического иммунитета продолжительностью до 1 года.
ПРОИЗВОДСТВО
Вакцинный штамм Y . pestis EV линии НИИЭГ должен обладать типичными морфологическими, культуральными и биохимическими свойствами; содержать плазмиды pFra, пестициногенности (pPst) и кальций-зависимости (pCad) с молекулярными массами » 60 , » 6 и » 47 MDa соответственно; не должен вызывать гибель морских свинок и потерю их массы при введении в дозе 15 10 9 микробных клеток (м.к.). Иммуногенность штамма по величине ЕD 50 при подкожном введении не должна превышать для морских свинок 10 3 м.к., для белых мышей – 10 4 м.к.
Перед приготовлением очередной серии вакцинного штамма Y . pestis EV линии НИИЭГ проводят его пассаж через организм морской свинки с последующим отбором типичных колоний, выросших на чашках Петри с агаром Хоттингера из посевов селезенки и регионарных лимфатических узлов.
Технология изготовления вакцины предусматривает получение посевных культур Y . pestis EV линии НИИЭГ I, II и III генераций; процесс накопления биомассы, выращенной для приготовления вакцинной взвеси с необходимой концентрацией; последующий розлив, замораживание, сублимационное высушивание, герметизацию и упаковку препарата. На стадиях приготовления посевных культур определяют рН, концентрацию микробных клеток и отсутствие посторонней микрофлоры.
В зависимости от технологии приготовления вакцины в процессе производства используются вспомогательные вещества, разрешенные для использования при производстве иммунобиологических лекарственных препаратов: сахароза, желатин, тиомочевина, декстрин, аскорбиновая кислота.
ИСПЫТАНИЯ
Описание
Пористая масса серовато-белого цвета.
Подлинность
Вакцина должна содержать чистую культуру вакцинного штамма Y . pestis EV линии НИИЭГ. Определение проводят иммунофлуоресцентным методом с помощью иммуноглобулинов чумных диагностических флуоресцирующих, в соответствии с инструкцией по применению. В мазках из препарата микробные клетки должны светиться по периферии ярко-зеленым цветом.
Время растворения
Должна полностью растворяться в течение 3 мин при добавлении 1,8 мл 0,9 % раствора натрия хлорида.
Восстановленный препарат – гомогенная суспензия серовато-белого цвета без посторонних примесей и хлопьев. Определение проводят визуально.
Время седиментационной устойчивости
Суспензия не должна расслаиваться в течение 5 мин. Определение проводят в соответствии с .
Размер частиц
Суспензия должна свободно проходить в шприц через иглу № 0840. Определение проводят в соответствии с .
рН
От 6,8 до 7,8. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с . Для испытания используют 5 образцов.
Потеря в массе при высушивании
Не более 4,0 %. Определение проводят гравиметрическим методом в соответствии с . Для испытания используют 5 образцов.
Средняя масса и отклонение от средней массы
Коэффициент вариации массы вакцины в ампулах (флаконах) должен быть не более 5 %. Определение проводят в соответствии с .
Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов
Вакцина не должна содержать посторонних микроорганизмов и грибов. Определение проводят в соответствии с методом прямого посева на тиогликолевую среду.
В ампулу (флакон) с вакциной вносят 2 мл 0,9 % раствора натрия хлорида. По 1 мл каждого образца полученной взвеси засевают в пробирки, содержащие по 20 мл тиогликолевой среды. Одну пробирку из каждого образца инкубируют при температуре от 30 до 35 о С для выявления аэробных и анаэробных микроорганизмов, другую — при температуре от 20 до 25 о С для выявления грибов. Через 5 – 7 сут из каждой пробирки производят пересев по 0,5 мл в 2 пробирки, содержащие по 10 мл тиогликолевой среды, и инкубируют при указанных выше температурах. Через 14 сут выращивания со дня первичного посева из всех пробирок делают мазки, окрашивают их по Граму, просматривают под микроскопом при увеличении К7×40.
В случае обнаружения хотя бы в одном из 10 просмотренных полей зрения кокков или грамположительных палочек препарат считается контаминированным посторонней микрофлорой.
При выявлении в мазках грамотрицательных палочек, отличающихся по морфологии от чумного микроба, готовят мазки, которые окрашивают иммуноглобулинами чумными диагностическими флуоресцирующими в соответствии с инструкцией по применению и просматривают в каждом мазке не менее 10 полей с помощью люминесцентного микроскопа. Если не все бактерии, обнаруживаемые в вакцине, дают специфическое ярко-зеленое свечение по периферии клеток, препарат считают не выдержавшим испытание.
Специфическая безопасность
Вакцина должна быть безопасной. Испытание проводят на морской свинке массой (275 ± 25) г.
Содержимое ампулы (флакона) растворяют в 1,8 мл 0,9 % раствора натрия хлорида, определяют концентрацию по методике, описанной в разделе «Специфическая активность (концентрация микробных клеток)», разводят 0,9 % раствором натрия хлорида до концентрации 15 · 10 9 м.к./мл и вводят подкожно в объеме 1 мл одной морской свинке во внутреннюю поверхность бедра.
На 6 сут морскую свинку взвешивают, подвергают эвтаназии, отмечают патологоанатомические изменения, обнаруживаемые при вскрытии. Печень, селезенку, легкие, регионарные лимфатические узлы, кровь и ткани из места введения высевают методом отпечатков на чашку Петри с агаром Хоттингера, рН (7,2 ± 0,1), с добавлением натрия сернистокислого 0,25 г на 1 л среды и на чашку Петри с агаром Хоттингера, рН (7,2 ± 0,1), с добавлением генцианвиолета 0,05 г на 1 л среды. Посевы инкубируют при температуре (27 ± 1) о С в течение 3 сут.
Вакцина не должна вызывать у морской свинки потерю массы к 6 сут после введения больше чем на 20 %, не должна вызывать видимых патологоанатомических изменений в легких — кровоизлияний, очагов воспаления, гранулем, абсцессов; в посевах крови и легких не должно быть роста чумного микроба. В месте введения допускается развитие кровоизлияния и инфильтрата подкожной клетчатки, переходящих в некроз. Во внутренних органах (селезенка и печень) допустимо развитие ограниченной узелковой реакции.
Специфическая активность
- Концентрация микробных клеток . В препарате должно содержаться от 5 · 10 10 до 10 11 м.к. в 1 мл. Определение проводят в 3 образцах для каждой серии. Колебания результатов определений в отдельных образцах не должны превышать 5 % от средней арифметической величины.
Содержимое ампулы (флакона) растворяют в 1,8 мл 0,9 % раствора натрия хлорида. В стандартную пробирку вносят 0,1 мл разведенного препарата и добавляют 0,9 % раствор натрия хлорида до достижения концентрации стандартного образца (СО) мутности (10 МЕ). Объем 0,9 % раствора натрия хлорида, использованный при разведении, учитывают при расчете концентрации микробных клеток (ОК) по формуле:
ОК = (0,1 + n ) ·10,
0,1 – объем растворенной вакцины, мл;
n – объем 0,9 % раствора натрия хлорида, использованный при разведении пробы, мл;
10 – постоянная величина.
- Количество живых микробных клеток . Количество живых микробных клеток должно составлять не менее 25 % от общего количества микробных клеток. Колебания результатов определения в отдельных образцах не должны превышать 20 % от средней арифметической величины.
При определении количества живых микробных клеток в вакцине используют концевые химически чистые пипетки и пробирки с 0,9 % раствором натрия хлорида, которые должны быть охлаждены до температуры от 2 до 8 о С.
Для определения количества живых микробных клеток из приготовленных ранее образцов взвесей вакцины делают последовательные десятикратные разведения от 10 -1 до 10 -8 , используя для каждого разведения отдельную пипетку вместимостью 1 мл. Из пробирок с разведениями 10 -7 и 10 -8 высевают пипеткой по 0,1 мл взвеси на 2 чашки Петри с питательной средой для выделения и культивирования чумного микроба или с агаром Хоттингера со стимулятором роста (кровь гемолизированная до 1 % концентрации) или натрий сернистокислый (0,25 г на 1 л среды).
Через 72 – 96 ч инкубации при температуре (27 ± 1) о С подсчитывают количество колоний для каждого образца, принимая за 100 % количество микробных клеток, высеянных, исходя из показателя общей концентрации микробных клеток для данного образца, определенной с помощью СО мутности (10 МЕ). За количество жизнеспособных микробных клеток для каждой серии принимают среднее арифметическое определений для 3 ампул (флаконов).
Исходя из количества жизнеспособных микробных клеток в ампуле (флаконе) с вакциной рассчитывают количество доз и объем растворителя каждой серии для приготовления суспензии для инъекций, накожного скарификационного нанесения и ингаляций.
Для достоверности полученных результатов параллельно используют стандартный образец вакцины чумной живой.
- Иммуногенность . ЕD 50 вакцины для морских свинок не должна превышать 10 4 , для белых мышей — 4 ·10 4 живых микробных клеток. Испытание проводят на морских свинках массой (275 ± 25) г и на белых нелинейных мышах массой (19 ± 1) г. Вакцину разводят с таким расчетом, чтобы в 1 мл содержалось 10 9 живых м.к. Исходя из заранее определенного количества живых м.к., вакцину разводят для иммунизации морских свинок до концентраций 2 · 10 5 ; 4 · 10 4 ; 8 · 10 3 и 16 · 10 2 м.к./мл; белых мышей — до концентраций 5 · 10 5 ; 1 · 10 5 ; 2 · 10 4 и 4 ·10 3 м.к./мл. Каждую дозу препарата вводят однократно 6 животным. Морских свинок иммунизируют подкожно во внутреннюю поверхность левого бедра в объеме 0,5 мл; белых мышей – в объеме 0,2 мл дозами 8 · 10 2 , 4 · 10 3 , 2 · 10 4 и 1 ·10 5 живых м.к.
Для определения фактического содержания живых микробных клеток в иммунизирующих дозах взвесь, содержащую 8 ·10 3 м.к./мл, используемую при иммунизации морских свинок, или дозу 4 · 10 3 м.к./мл для иммунизации белых мышей, разводят до концентрации 10 3 м.к./мл. По 0,1 мл взвеси с концентрацией 10 3 м.к./мл (100 м.к.) высевают на 3 чашки Петри с одной из вышеперечисленных питательных сред и инкубируют при температуре (27 ± 1) о С в течение 48 ч. Количество выросших колоний на чашках учитывают при вычислении ЕD 50 испытуемой серии.
Подкожное заражение морских свинок проводят во внутреннюю поверхность правого бедра на 21 сут, мышей – в ту же область на 7 или 21 сут после иммунизации. Заражающая доза для иммунизированных вакциной животных составляет 200 Dcl (Dosis certa letalis = LD 100) вирулентного штамма чумного микроба, 1 Dcl которого не должна превышать 100 микробных клеток.
Подготовка заражающего штамма Y . pestis 231 должна быть указана в нормативной документации.
Для заражения неиммунизированных (контрольных) животных используют взвесь с концентрацией 50 м.к./мл в объеме 0,5 мл для морских свинок и 125 м.к./мл в объеме 0,2 мл для белых мышей, что соответствует 1 Dcl.
Для определения фактического содержания микробных клеток заражающего штамма по 0,1 мл взвеси культуры Y . pestis 231, содержащей 10 3 м.к./мл, высевают на 3 чашки Петри с агаром Хоттингера и равномерно распределяют по всей поверхности среды методом «обкатки» чашек. Посевы инкубируют при температуре (27 ± 1) ºС в течение 48 ч, после чего подсчитывают количество выросших колоний.
Наблюдение за зараженными животными ведут в течение 20 сут. Все контрольные животные должны погибнуть от чумы в течение 10 сут. Погибших животных вскрывают, берут органы и ткани (у морских свинок берут пробы из места введения, регионарных паховых лимфатических узлов, печени, селезенки, легких, верхушки сердца; у белых мышей – из селезенки), высевая их методом отпечатков на чашки Петри с агаром Хоттингера с добавлением генцианвиолета и с агаром Хоттингера — с натрием сернистокислым. Чашки Петри инкубируют при температуре (27 ± 1) ºС. Учет результатов проводят через 24 — 48 ч.
Павшими от чумы считают только тех животных, из органов которых при высеве выделяется культура Y . pestis .
ЕD 50 вычисляют по формуле:
lg ED 50 = lg D N – S · (∑L i – 0,5),
lg D N – логарифм максимальной иммунизирующей (фактической) дозы;
S – логарифм кратности разведений;
L i — отношение количества животных, выживших при иммунизации данной дозой, к общему количеству животных, которым эта доза была введена;
∑L i — сумма значений L i , найденных для всех испытанных доз.
Если все контрольные животные выжили, или значение ЕD 50 будет более допустимого, контроль повторяют на таком же количестве животных. Если при повторном испытании значение ЕD 50 будет выше допустимого, препарат считают не выдержавшим испытание.
Термостабильность
Не менее 4 сут. Показатель термостабильности (срок, в течение которого в препарате сохраняется 50 % живых микробных клеток по отношению к первоначальному количеству) определяют в 3 образцах после хранения вакцины при температуре (37 ± 1) о С в течение 14 сут.
Методика определения количества живых микробных клеток изложена в разделе «Специфическая активность». Показатель термостабильности (t ) в сут рассчитывают по формуле:
lg A 0 – логарифм первоначального количества живых м.к./мл;
lg A n – логарифм количества живых м.к./мл через 14 сут хранения вакцины при температуре (37 ± 1) °C;
0,3 – постоянная величина;
14 – срок хранения вакцины при температуре (37 ± 1) °C, сут.
Вакцины - препараты, служащие для создания активного искусственного приобретенного иммунитета. В настоящее время известны следующие вакцинные препараты:
1) живые вакцины, представляющие собой ослабленные в своей вирулентности различные микроорганизмы;
2) убитые, содержащие инактивированные возбудители заболеваний;
3) химические, состоящие из растворимых антигенов бактерий, извлеченных химическими методами;
4) анатоксины, обезвреженные формалином экзотоксины возбудителей токсинемических инфекций.
Препараты, предназначенные для проведения иммунизации против одной какой-нибудь инфекции, получили название моновакцины; против двух инфекционных заболеваний - дивакцины; против трех - тривакцины; против нескольких инфекций - поливакцины. Ассоциированными вакцинами называются препараты, содержащие смесь из антигенов различных бактерий и анатоксинов. Применение ассоциированных вакцин, таких как АКДС (см. с. 19) или TABte (см. с. 17) дает возможность создавать иммунитет в отношении нескольких инфекций и сокращать число прививок.
Поливалентными вакцинами принято называть препараты, которые включают несколько разновидностей или серологических типов возбудителей одной инфекции (например, противогриппозные, лептоспирозные и др.).
Живые вакцины
Живые вакцины представляют собой мутанты, то есть вакцинные штаммы микроорганизмов с остаточной вирулентностью, не способные вызывать специфические заболевания, но сохранившие способность размножаться и находиться в организме, приводя к развитию бессимптомной вакцинной инфекции.
Вакцинные штаммы для приготовления живых вакцин были получены различными путями: методом отбора (селекции) мутантов с ослабленной вирулентностью, методом экспериментального направленного изменения вирулентных свойств возбудителя, длительным пассированием в организме животных, методом генетического скрещивания (получения реком-бинантов).
Селекция широко использовалась исследователями при отборе среди лабораторных штаммов спонтанно возникших Мутантов с ослабленной вирулентностью. Так были получены чумная, бруцеллезная, туляремийная вакцины, сибиреязвенная, полиомиелитная и другие.
Метод направленного изменения вирулентности микроорганизмов, связанный с длительным культивированием при неблагоприятных условиях, был разработан Л. Пастером. Пастер, изучая возбудителя куриной холеры, однажды оставил культуры в термостате на длительный срок без пересева. Зараженные этими культурами куры не заболевали и что еще более важно - при последующем введении свежих вирулентных возбудителей холеры, не реагировали заболеванием.
Это наблюдение легло в основу обобщающего вывода, что аттенуированные (т. е. ослабленные в своей вирулентности) микроорганизмы обладают способностью вызывать невосприимчивость к вирулентным возбудителям заболеваний. Таким образом, Л. Пастер разработал научные основы получения живых вакцин, установив возможность искусственного ослабления вирулентности патогенных микроорганизмов. Основываясь на своих наблюдениях по получению аттенуированной культуры куриной холеры, Пастер уже целенаправленно создает вакцину против сибирской язвы. Сибиреязвенная вакцина была получена при длительном выращивании сибиреязвенных бацилл при повышенной температуре 42°С (см. с. 8), что и привело к ослаблению вирулентности (действие физического фактора).
Двум французским микробиологам А. Кальметту и Г. Герену удалось получить вакцинный штамм (БЦЖ) пассированием микобактерий туберкулеза бычьего типа на среде с желчью. Желчь и явилась тем фактором, который вызвал снижение вирулентности (воздействие химического вещества).
Л. Пастером была получена вакцина против бешенства (см. с. 10) как результат длительного пассирования вируса уличного бешенства в организме одного и того же вида животных- на кроликах. Многократное пассирование через мозг кролика привело к тому, что вирус максимально адаптировался к мозгу кролика, резко возросла вирулентность вируса для кролика и снизилась для человека и других животных.
В последние годы был применен еще один метод для получения вакцинных штаммов, основанный на использовании генетических скрещиваний, результатом которых являются рекомбинанты со сниженной вирулентностью. Так был получен вакцинный штамм вируса гриппа А при взаимодействии авирулентного исходного штамма (содержащего гемагглютинин Н 2 и нейраминидазу N 2) и вирулентного штамма Гонконг (H 3 N 2). Рекомбинант содержал гемагглютинин Н 3 вирулентного вируса Гонконг и сохранил авирулентность исходного вакцинного штамма.
Живые вакцины имеют целый ряд преимуществ в сравнении с другими видами вакцин, и связано это свойство с тем, что пребывание и размножение в организме человека и животных аттенуированных вакцинных штаммов приводит к развитию вакцинной инфекции (специфического инфекционного заболевания без выраженных клинических симптомов). Вакцинная инфекция, проявляясь ли в виде местного воспалительного процесса или сопровождаемая общей реакцией организма, всегда влечет за собой перестройку иммунобиологических свойств организма и выражается в выработке специфического иммунитета.
Живые вакцины, как правило, вводятся однократно и более простыми способами (перорально, интраназально, накожно, реже подкожно). Способность вакцинного штамма размножаться и присутствие в организме постоянного антигенного раздражителя обеспечивает напряженный, прочный и довольно длительный иммунитет.
К вакцинным штаммам предъявляются следующие основные требования:
а) наличие остаточной вирулентности;
б) достаточная иммуногенность;
в) отсутствие возможности реверсии к исходным свойствам.
Таким образом, вакцинные штаммы должны обладать стойкими, наследственно закрепленными аттенуированными свойствами.
Для сохранения жизнеспособности и стабильности свойств большинство живых вакцин выпускают в сухом виде, что достигается методом лиофилизации - высушивание из замороженного состояния под глубоким вакуумом. Сухие вакцины могут сохраняться в течение года и более при температуре холодильника (не выше 4°-8°С).
В настоящее время в практике применяются следующие живые вакцины.
1. Сибиреязвенная вакцина - первая живая вакцина, которая была получена в 1881 г. Л. Пастером.
Пастер выдерживал культуру возбудителя сибирской язвы в термостате при температуре 42° в течение 12 и 24 дней, получив таким образом два вакцинных штамма: 12-дневный (более вирулентный) и 24-дневный (более ослабленный). Инкубация при такой неблагоприятной температуре привела к частичному снижению вирулентности и утрате способности образовывать споры.
В России по методу, предложенному Пастером, самостоятельно создал вакцину против сибирской язвы Л. С. Ценковский, которая и использовалась для вакцинации животных с 1883 г. по 1942 г.
В 1940 году Н. Н. Гинзбургом и А. Л. Тамариной при культивировании на особых питательных средах отобран бескапсульный вариант сибиреязвенных бацилл, получивший название СТИ-1 (Санитарно-технический институт). Готовый препарат представляет собой споровую культуру вакцинного бескапсульного штамма и предназначен для специфической профилактики сибирской язвы у людей и животных. В зависимости от показаний, вакцина вводится накожно или подкожно.
2. Чумная вакцина (EV) получена Г. Жираром и Ж. Робиком в 1931 г. длительным (5-летним) культивированием чумных бактерий на мясо-пептонном агаре при температуре 16-20°С.
Вакцина представляет собой взвесь живых бактерий вакцинного штамма в сахарозо-желатиновой среде, высушенной методом лиофилизации. Профилактические прививки чумной вакциной проводятся по эпидемическим показаниям накожным или подкожным способом.
3. Туляремийная накожная вакцина получена Н. А. Тайским и Б. Я. Эльбертом в 1942-1946 гг. методом селекции из лабораторных штаммов с ослабленной вирулентностью.
Вакцина вводится накожно (скарификационным методом) или внутрикожно (струевым методом при помощи безыгольного инъектора) при профилактике туляремии в эндемичных по этой инфекции Рамонах.
4. Бруцеллезная накожная вакцина получена П. А. Вершиловой методом селекции и представляет собой вакцинный штамм № 19 - ВА - слабовирулентный штамм Br. abortus, который обеспечивает иммунитет ко всем трем видам бруцелл.
Вакцинацию населения проводят в Рамонах неблагополучных по бруцеллезной инфекции (наличие бруцеллеза у крупного и мелкого рогатого скота или при выделении бруцелл от других домашних животных). Вакцину вводят только накожно.
5. Вакцина БЦЖ (франц.- BCG-Bacille Calmette Guerin) была получена в 1919 г. А. Кальметтом и М. Гереном длительным пассированием туберкулезных микобактерий бычьего типа на картофельно-глицериновой среде с добавлением желчи. Ими было сделано 230 пересевов в течение 13 лет и получен штамм со сниженной вирулентностью.
В настоящее время вакцина БЦЖ применяется для вакцинации новорожденных на 5-7-й день жизни и последующих ревакцинаций (в 7, 12 и 17 лет) при отрицательных туберкулиновых пробах. Вакцина вводится внутрикожно на наружную поверхность плеча левой руки.
Одним из показателей приобретенного иммунитета в результате вакцинации является переход отрицательной туберкулиновой пробы в положительную с учетом интенсивности реакции и продолжительности во времени с момента введения БЦЖ.
6. Оспенная дермальная вакцина. Вакцинацию против оспы впервые применил Дженнер Э. (1796), вводя здоровым людям инфекционный материал от больных оспой коров. Дженнер исходил из народного наблюдения, что доярки, заражающиеся от коров оспой, легко переболевают коровьей оспой и в дальнейшем не заболевают натуральной оспой.
В СССР для создания активного иммунитета против оспы применяют дермальную оспенную вакцину. Для получения вакцинного материала используют телят, на скарифицированную кожу которых наносят вирус осповакцины. На 5-й день в период максимального накопления вируса собирают соскабливанием оспенный детрит. Детрит гомогенизируют и обрабатывают фреоном 113 для удаления балластных веществ и сопутствующей микрофлоры. Вакцина выпускается со стабилизатором- пептоном, в высушенном виде; для растворения вакцины применяется 50% стерильный раствор глицерина, ампула которого прилагается к каждой вакцине. Вакцина наносится на скарифицированную кожу наружной поверхности плеча.
В настоящее время (с 1 января 1980 г.) обязательное оспопрививание отменено в связи с ликвидацией этого заболевания во всем мире.
7. Антирабическая вакцина. Вакцину против бешенства впервые получил в 1885 г. Л. Пастер пассированием вируса уличного бешенства на кроликах. Пастер провел 133 последовательных пассажа, вводя вирус бешенства интрацеребрально. Пассируя вирус от кролика к кролику, он добился снижения инкубационного периода бешенства у кроликов с 21 дня до 7 дней. Вирус, максимально адаптированный к центральной нервной системе кролика, получил название фиксированного вируса (virus fixe) и отличается от вируса уличного бешенства способностью вызывать заболевание у кроликов после короткого инкубационного периода (7-4 дня), большей активностью размножения в мозге (не вызывая образование телец Бабеша-Негри), не выделяется со слюной, и почти утратил свои патогенные свойства при подкожном введении кролику. В антигенном отношении virus fixe сохранил единство с уличным (диким) вирусом бешенства.
Инактивацию вируса fixe Пастер проводил дополнительным высушиванием кусочков мозга зараженных кроликов над парами едкого калия в разные сроки (от 1 дня до 16).
В настоящее время для лечебно-профилактических прививок против бешенства применяются следующие вакцины: антирабическая вакцина типа Ферми и культуральная антирабическая вакцина.
Вакцина Ферми представляет собой гомогенизированную суспензию мозга овец, зараженных вирусом fixe, на изотоническом растворе хлорида натрия с добавлением фенола. Вакцина содержит небольшое количество живого фиксированного вируса.
Инактивированная культуральная антирабическая вакцина (Института полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН
СССР) представляет собой фиксированный вирус бешенства штамм «Внуково-32», выращенный на культуре ткани почек сирийского хомяка и обезвреженный фенолом или ультрафиолетом.
Курс антирабических прививок назначают при укусах, царапинах, ослюнении бешеным или подозрительным на заболевание животным, а также при укусах летучих мышей, диких животных, бродячих собак и кошек (наблюдение за которыми невозможно). Вакцину вводят строго подкожно в область живота.
8. Полиомиелитная пероральная живая вакцина типов I, II, III (ЖВС) получена в 1958 г. А. Сейбиным из мелкобляшкообразующих вирусов полиомиелита. Аттенуированные вирусы дают мелкие бляшки под агаровым покрытием и обладают способностью размножаться при сравнительно низкой температуре (23°С).
Они потеряли способность размножаться в клетках нервной системы и сохранили энтеротропные свойства. Вакцинные штаммы вируса полиомиелита всех трех типов (I, II, III) выращиваются на первичных культурах почечных клеток африканских зеленых мартышек и выпускаются в форме конфет-драже (моновакцины и тривакцины, содержащие смеси вирусов трех типов) или в жидком виде.
Вакцина применяется для профилактической иммунизации против полиомиелита, начиная с 2-месячного возраста в соответствии с календарем прививок, последовательно с интервалом 4-6 недель (I, III, II типа). Вакцина принимается внутрь и запивается молоком или водой.
Вакцинный штамм вызывает вакцинальную инфекцию, так как вирус размножается в кишечнике и может передаваться другим людям, как и при естественном заболевании. Это очень ценное свойство вакцины, так как приводит к иммунизации всех тех лиц, которые еще не приобрели иммунитета к полиомиелиту.
9. Коревая вакцина представляет собой аттенуированный штамм вируса кори - Л-16 (выделенный в Ленинградском институте им. Пастера из крови ребенка, больного корью, и прошедший 23 пассажа на первичной культуре клеток почек морской свинки).
Вакцину приготавливают из культуральной жидкости при выращивании вакцинного штамма Л-16 на культуре клеток почек новорожденных морских свинок (или фибробластах
эмбрионов японских перепелок), освобождают от тканевых элементов и лиофилизируют.
Вакцинации подлежат дети в возрасте от 10 месяцев до 8 лет, препарат вводится подкожно под лопатку.
10. Гриппозная вакцина для интраназального применения представляет собой аллантоисную жидкость из куриных эмбрионов, зараженных вакцинными штаммами вируса, соответственно циркулирующим эпидемическим штаммом. Вакцина выпускается в виде моновакцины типов А 2 и В, вводится интраназально в осенне-зимний период, за 2-3 месяца до начала эпидемического подъема гриппа.
Вакцина вызывает бессимптомную вакцинальную инфекцию с развитием общего и особенно местного иммунитета, обусловленного появлением местных секреторных антител (IgA), которые препятствуют проникновению вируса в клетки.
Гриппозную вакцину для перорального введения получают при культивировании аттенуированных вакцинных штаммов вирусов гриппа на культуре клеток почек куриных эмбрионов в виде моновакцин типов А 2 и В. Пероральная вакцина вызывает вакцинальную инфекцию с развитием гуморального иммунитета.
11. Вакцина против желтой лихорадки (ВЖЛ). Препарат представляет собой живой аттенуированный вирус желтой лихорадки (штамм 17-Д), выращиваемый в курином эмбрионе или в культуре ткани из куриного эмбриона. Вакциной прививают лиц, постоянно проживающих в Рамонах, эндемичных по желтой лихорадке, и людей, выезжающих в эти районы. Привитые получают сертификат установленного ВОЗ образца. Препарат вводится подкожно в области верхней трети плеча.
12. Живая комбинированная сыпнотифозная вакцина Е (ЖКСВ-Е) представляет собой смесь аттенуированного штамма риккетсий Провачека (штамм «Мадрид Е»), выращенного в желточных мешках куриных эмбрионов, с растворимым антигеном, извлеченным из убитой вирулентной культуры риккетсий Провачека (штамм «Брейнль»), Вакцина вводится подкожно, по эпидемическим показаниям.
13. Вакцина против Ку-лихорадки (М-44) - мутант со сниженной вирулентностью, полученный при последовательном пассировании риккетсий Бернета в желточном мешке куршых эмбрионов на 44-м пассаже.
Вакцина вводится накожно, по эпидемическим показаниям, в Рамонах, где зарегистрированы случаи заболевания Ку-лихорадкой.
Убитые вакцины
Убитые - корпускулярные вакцины содержат взвеси бактерий, вирусов или риккетсий, инактивированных повышенной температурой или различными химическими веществами. Убитые вакцины применяются для профилактики инфекционных заболеваний, а также с лечебной целью (для стимуляции защитных свойств организма при хронических процессах).
Для получения убитых вакцин используют высокопатогенные штаммы, полноценные в отношении вирулентности и антигенного строения, отобранные после тщательного изучения. Бактериальные культуры при приготовлении вакцин выращивают в специальных реакторах с жидкой питательной средой, позволяющих получать одновременно сотни литров бактериальной взвеси.
Инактивация бактериальной массы проводится так, чтобы надежно убить бактерии с минимальным повреждением антигенных свойств. Так, гретые вакцины получают при прогревании бактерийной взвеси при 56°С, не более. При воздействии химических веществ соответственно готовят формалиновые, феноловые, спиртовые, ацетоновые вакцины.
Преимуществом убитых вакцин является относительная простота их получения, не требующая длительного выделения и изучения штаммов, большая устойчивость при хранении и более длительный срок пригодности. К недостаткам вакцин из убитых бактерий следует отнести их меньшую иммуногенность и необходимость двух или трехкратных прививок. А такие вакцины как формалинизированные еще и достаточно реактогенны, вызывая местную реакцию (боль, чувство жжения на месте введения) и общие явления с повышением температуры тела.
Иммунитет после введения убитых вакцин менее продолжителен в сравнении с иммунитетом, развивающимся после вакцинации живыми вакцинами.
В настоящее время применяются следующие убитые вакцины:
1. Брюшнотифозная спиртовая вакцина, обогащенная Vi - антигеном - комплексный препарат, состоящий из брюшнотифозных бактерий (инактивированных спиртом) и Vi - антигена S. typhi, который выполняет и роль растворителя. Vi - антиген - вещество полисахаридной природы, которое извлекается из брюшнотифозных бактерий (полноценного в антигенном отношении штамма Ту 2 4446).
Применяется по эпидемическим показаниям, преимущественно для детей (от 7 до 15 лет), вводится строго подкожно.
2. Брюшнотифозная гретая вакцина содержит взвесь тифозных бактерий, выращенных в реакторе в жидкой питательной среде (в условиях аэрации) и убитых в течение часа при 56°С. Вакцина вводится подкожно, только в подлопаточную область.
3. Холерная вакцина содержит 8 млрд. вибрионов биотипов Vibrio cholerae и Vibrio eltor типов Инаба и Огава (по 2 млрд. каждого биотипа каждого серологического типа), убитых нагреванием или формалином.
Вакцина вводится подкожно взрослым и детям (старше 2 лет), по эпидемическим показаниям, при неблагоприятной эпидемической обстановке.
4. Коклюшная вакцина содержит 20 млрд. коклюшных бактерий в гладкой форме (1 фаза), убитых формалином или мертиолатом. Как отдельная вакцина не применяется, а используется в составе ассоциированного препарата АКДС (см. с. 19).
5. Лептоспирозная вакцина представляет собой взвесь убитых нагреванием лептоспир, наиболее распространенных серологических типов (Leptospira icterohaemorragia, grippotyphosa, pomona, canicola).
Против лептоспироза вакцинируют людей в очагах инфекции, по эпидемиологическим показаниям. Препарат вводится подкожно.
6. Инактивированная культуральная вакцина против клещевого энцефалита включает в себя культуральный антиген вируса клещевого энцефалита, инактивированного формалином. Вакцина вводится подкожно.
Вакцины из убитых бактерий с успехом применяются и для лечения инфекционных заболеваний, имеющих характер хронического процесса (бруцеллез, хроническая дизентерия, хроническая гонорея, стафилококковые инфекции). Вакцины из убитых бактерий вводятся при недостаточной эффективности лекарственных препаратов, часто связанной со снижением антибиотикочувствительности возбудителей.
Действующим началом таких вакцин является микробная клетка с входящими в ее состав антигенами, которые стимулируют иммуногенез. При лечении убитыми вакцинами активируются фагоцитарные свойства лейкоцитов и клеток макрофагальной системы, усиливается иммуногенез. Действие вакцин строго специфично, применение индивидуально. Это связано с тем, что вакцинотерапия вызывает у больных, как правило, обострение инфекционного процесса. Применение получили следующие препараты.
1. Бруцеллезная жидкая вакцина - взвесь убитых нагреванием бруцелл (возбудителей бруцеллеза овечьего и бычьего типов).
Вакцину водят внутривенно при лечении больных бруцеллезом на всех стадиях заболевания - острой, подострой, хронической форме и в период ремиссий. Вакцина вызывает инфекционно-аллергическую перестройку организма.
2. Дизентерийная спиртовая вакцина представляет собой взвесь дизентерийных бактерий видов Флекснера и Зонне, убитых этиловым спиртом.
Дизентерийная вакцина применяется с целью лечения больных хроническими формами дизентерии (вне обострения), с поздно выявленными формами заболевания, по определенной схеме, указанной в наставлений. Вакцину вводят подкожно в подлопаточную область.
3. Гонококковая вакцина - взвесь гонококков нескольких (не менее 12) свежевыделенных штаммов, убитых нагреванием.
Применяется для лечения больных с хронической и острой формами гонореи, а также при различных осложнениях (гонорейные эпидидимиты, бартолениты, аднекситы, артриты). Вакцина вводится внутримышечно.
4. Стафилококковая вакцина представляет собой инактивированную (при 56°С в течение 2 час.) взвесь 10-12 патогенных стафилококков, выделенных от больных со стафилококковыми поражениями кожи. В 1 мл вакцины должно содержаться 2 млрд. микробных тел в 0,25%-ном феноле, добавляемом в качестве консерванта.
Стафилококковую вакцину используют с целью специфического лечения больных с различными заболеваниями стафилококковой этиологии (фурункулез, пиодермии, абсцессы, флегмоны и т. п.), причем вводить можно подкожно, внутримышечно и внутрикожно.
Для лечебных целей иногда применяют так называемые аутовакцины, которые получают в каждом отдельном случае специально из убитых бактерий возбудителей, выделенных от данного больного.
Химические вакцины
Химическими вакцинами принято называть препараты, содержащие наиболее активные по иммунологическим свойствам антигены, извлекаемые из микробных клеток различными методами (например, ферментативным перевариванием с последующим осаждением антигена этиловым спиртом). Следует помнить, что термин «химическая» вакцина не вполне соответствует своему названию, так как такие вакцины не являются химическими веществами в чистом виде, а представляют собой группы антигенов, эндотоксины и т. д.
Преимущество химических вакцин в том, что, во-первых, из микробных клеток выделяются иммунологически активные субстанции - изолированные антигены (комплекс - липополисахариды с полипептидами или протективные антигены), во-вторых, они менее реактогенны, в-третьих, стабильны и легче подвергаются стандартизации, что дает возможность более точно дозировать, и, наконец, четвертое - химические вакцины можно вводить в больших дозах и в виде ассоциированных препаратов.
Одним из недостатков химической вакцины являются небольшие размеры вводимых комплексов, что приводит к быстрому выведению их из организма и краткому антигенному раздражению. Поэтому химические вакцины вводятся на адъювантах (лат. adjuvans - помогающий), в качестве которых используются различные минеральные адсорбенты (гидрат окиси алюминия, фосфат кальция), минеральные масла. Адъюванты способствуют повышению эффективности вакцинации, так как они укрупняют антигенные частицы, создают в месте введения «депо», из которого происходит замедленная резорбция антигена, что приводит к перманентному антигенному раздражению. Кроме того, депонирующие вещества являются неспецифическими стимуляторами, вызывая приток плазматических клеток, непосредственно участвующих в выработке антител, что связано с развитием местного воспалительного процесса и стимуляции пролиферативной и фагоцитарной активности ретикуло-эндотелиальной системы.
В настоящее время в СССР выпускается и применяется химическая тифозно-паратифозная вакцина, которая готовится в нескольких вариантах в зависимости от состава включенных компонентов.
Анатоксины
Анатоксины (anatoxinum от греч.- «an» - отрицание и «toxo» - отравляю) представляют собой препараты, полученные из бактериальных экзотоксинов, полностью лишенные токсических свойств, но сохранившие антигенные и иммуногенные свойства. Метод получения анатоксина предложил в 1923 году крупнейший французский ученый Рамон (G. Ramon).
При приготовлении анатоксинов культуры бактерий - возбудителей токсинемических инфекций, продуцирующих экзотоксины, выращивают в жидких питательных средах (реакторах большой емкости) для накопления токсина. Затем фильтруют через бактериальные фильтры для удаления микробных тел.
К фильтрату добавляют 0,3-0,4 % -формалина и помещают в термостат при температуре 37°-40°С на 3-4 недели до полного исчезновения токсических свойств. Полученный анатоксин проверяют на стерильность, безвредность и иммуногенность.
Такие препараты получили название нативных анатоксинов, т. к. они содержат большое количество веществ питательной среды, которые являются балластными и могут способствовать развитию нежелательных реакций организма при введении препарата. Нативные анатоксины необходимо вводить в больших дозах из-за их невысокой удельной активности.
Поэтому в настоящее время применяются преимущественно очищенные анатоксины, для чего нативные анатоксины подвергают обработке различными физическими и химическими методами (ионнообменной хромотографии, кислотному осаждению и др.), чтобы освободить от всех балластных веществ и сконцентрировать препарат в меньшем объеме. Однако уменьшение размеров частиц анатоксина сделало необходимым адсорбировать препарат на адъювантах (см. с. 16). Таким образом, применяющиеся анатоксины являются адсорбированными высокоочищенными концентрированными препаратами.
Специфическую активность или силу анатоксина определяют в реакции флоккуляции в так называемых единицах флоккуляции - (Lf) или по реакции связывания анатоксинов, выражающуюся в единицах связывания- (ЕС).
Титрованиеанатоксиноввреакции флоккуляции (по методу Рамона) производят по стандартной флоккулирующей антитоксической сыворотке, в которой известно количество международных антитоксических единиц (ME, см. с. 23) в 1 мл. Одна антигенная единица анатоксина обозначается Limes flocculationis (Lf - порог флоккуляции), это то количество анатоксина, которое вступает в реакцию флоккуляции с одной единицей дифтерийного антитоксина. Определив дозу анатоксина, давшую инициальную (первичную) реакцию флоккуляции с одной антитоксической единицей сыворотки, рассчитывают количество Lf препарата в 1 мл.
Антигенные свойства столбнячного анатоксина (и некоторых других) обозначают в единицах связывания (ЕС). Для определения ЕС необходимы: испытуемый препарат анатоксина, стандартная антитоксическая сыворотка (с содержанием 0,1 ME в 1 мл), опытная доза токсина (вытитрованная к 0,1 ME стандартной сыворотки), белые мыши.
Реакцию связывания проводят следующим образом: в ряд пробирок с одинаковым объемом стандартной сыворотки добавляют различные разведения испытуемого анатоксина. Смесь для связывания выдерживают в термостате 45 минут, затем в каждую пробирку добавляют опытную дозу токсина и вновь оставляют в термостате на 45 минут. После этого из каждой пробирки вводят смесь (сыворотки - анатоксина - токсина) 2-4 мышам и наблюдают за состоянием животных в течение 4 суток. Если весь анатоксин, добавленный к сыворотке, связался ею, то добавление токсина и последующее заражение мышей ведет к их гибели. При недостаточной дозе анатоксина для связывания всей сыворотки, добавленный токсин нейтрализуется сывороткой, и мыши остаются живыми.
Для расчета ЕС в 1 мл определяемого анатоксина берется то разведение анатоксина, при котором происходит гибель
50% белых мышей на 4-е сутки. Это количество анатоксина содержит дозу, связывающую 0,1 ME сыворотки.
Анатоксины применяются для профилактики и реже для лечения токсинемических инфекций (дифтерия, газовая гангрена, ботулизм, столбняк) и некоторых заболеваний, вызванных стафилококками.
Анатоксины выпускаются в виде монопрепаратов и в составе ассоциированных вакцин, предназначенных для иммунизации против нескольких заболеваний.
1. Дифтерийный анатоксин адсорбированный представляет собой фильтрат токсигенного штамма дифтерийной палочки «Парк Вильяме 8», обезвреженный по методу Рамона. В 1 мл анатоксина содержится 60 Lf (флоккулирующих единиц).
Применяется для профилактики дифтерии в виде моноанатоксина, чаще в составе АДС или АКДС
2. Столбнячный анатоксин сорбированный - препарат, полученный из фильтрата бульонной культуры столбнячной палочки, обезвреженный по методу Рамона при 40°С.
В 1 мл столбнячного анатоксина содержится не менее 20 ЕС.
Применяется в составе АКДС для иммунизации против столбняка детей в возрасте от 6 месяцев до 5 лет с последующими ревакцинациями.
3. Дифтерийно-столбнячный анатоксин адсорбированный
(АДС) содержит 60 Lf дифтерийного и 20 ЕС столбнячного анатоксина.
АДС используют вместо вакцины АКДС при отсутствии необходимости иммунизации против коклюша.
4. Адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина (АКДС) содержит коклюшные бактерии I фазы, убитые мертиолатом, дифтерийный и столбнячный анатоксины и служит для иммунизации детей против соответствующих инфекций. В 1мл АКДС содержится 30 Lf дифтерийного анатоксина, 10 ЕС столбнячного анатоксина и 20 млрд коклюшных микробных тел.
5. Адсорбированный стафилококковый анатоксин - фильтрат бульонной культуры стафилококков, обезвреженный по методу Рамона. Препарат должен содержать 10 ЕС в 1 мл.
Анатоксин применяют для профилактики и лечения различных воспалительных процессов, вызываемых стафилококками.
6. Ботулинический анатоксин выпускается в виде полиана-токсина, в препарате содержатся анатоксины, полученные из экзотоксинов возбудителя ботулизма А, В, С, Е.
Для специфической профилактики полианатоксин рекомендуется вводить работникам лабораторий, имеющих контакт с ботулотоксином.
7. Анатоксины из экзотоксинов возбудителей газовой гангрены CI. perfringens и CI. novii входят в состав комплексного препарата - сорбированной брюшнотифозной вакцины с секстаанатоксином.
ВАКЦИНЫ (лат. vaccinus коровий) - препараты, получаемые из бактерий, вирусов и других микроорганизмов или продуктов их жизнедеятельности и применяемые для активной иммунизации людей и животных с целью специфической профилактики и лечения инфекционных болезней.
История
Еще в древние времена было установлено, что перенесенная однажды заразная болезнь, напр, оспа, бубонная чума, предохраняет человека от повторного заболевания. В последующем эти наблюдения развились в учение о постинфекционном иммунитете (см.), т. е. о повышенной специфической устойчивости против возбудителя, наступающей после перенесения вызванной им инфекции.
Давно было замечено, что люди, перенесшие болезнь в легкой форме, становятся невосприимчивыми к ней. На основе этих наблюдений у многих народов применялось искусственное заражение здоровых людей инфекционным материалом в надежде на легкое течение болезни. Например, с этой целью китайцы вкладывали в нос здоровым людям высушенные и размельченные оспенные струпья от больных. В Индии размельченные оспенные струпья прикладывали к коже, предварительно натертой до ссадин. В Грузии с той же целью делали уколы кожи иглами, смоченными оспенным гноем. Искусственную прививку оспы (вариоляцию) стали применять и в Европе, в частности в России, в 18 в., когда эпидемии оспы приняли угрожающие размеры. Однако этот метод предохранительных прививок не оправдался: наряду с легкими формами заболевания у многих привитая оспа вызывала тяжелое заболевание, а сами привитые становились источниками заражения окружающих. Поэтому в начале 19 в. вариоляция в европейских странах была запрещена. Африканские народы продолжали применять ее и в середине 19 в.
В связи с распространением вариоляции искусственные прививки заразного материала предпринимались и при некоторых других инфекциях: кори, скарлатине, дифтерии, холере, ветряной оспе. В России в 18 в. Д. С. Самойлович предлагал прививать гной из чумных бубонов лицам, непосредственно соприкасающимся с больными. Указанные попытки предохранения людей от инфекционных болезней сохраняют теперь лишь исторический интерес.
Введение в организм человека или домашних животных современных В. имеет целью добиться выработки прививочного иммунитета, аналогичного постинфекционному иммунитету, но с исключением опасности развития инфекционной болезни в результате прививок (см. Вакцинация). Впервые такая В. для иммунизации людей против оспы была получена английским врачом Э. Дженнером с использованием инфекционного материала от коров (см. Оспопрививание). Дата публикации труда Э. Дженнера (1798) считается началом развития вакцинопрофилактики, к-рая в течение первой половины 19 в. получила широкое распространение в большинстве стран мира.
Дальнейшее развитие учения о В. связано с работами основоположника современной микробиологии - Л. Пастера, который установил возможность искусственного ослабления вирулентности патогенных микробов (см. Аттенуация) и применения таких «аттенуированных» возбудителей для предохранительных прививок против холеры кур, сибирской язвы с.-х. животных и бешенства. Сопоставив свои наблюдения с открытой Э. Дженнером возможностью защиты людей от натуральной оспы прививкой им коровьей оспы, Л. Пастер создал учение о предохранительных прививках, а применяемые для этой цели препараты предложил в честь открытия Э. Дженнера называть В.
На последующих этапах развития учения о вакцинах большое значение имели работы Η. Ф. Гамалеи (1888), Р. Пфейффера и В. Колле (1898), показавшие возможность создания иммунитета не только прививками ослабленных живых микробов, но и убитыми культурами возбудителей болезней. Η. Ф. Гамалеи показал также принципиальную возможность иммунизации химическими В., получаемыми извлечением из убитых микробов иммунизирующих фракций. Большое значение имело открытие Г. Рамоном в 1923 г. нового вида вакцинирующих препаратов - анатоксинов.
Виды вакцин
Известны следующие виды вакцин: а) живые; б) убитые корпускулярные; в) химические; г) анатоксины (см.). Препараты, предназначенные для иммунизации против какой-либо одной инфекционной болезни, называют моновакцинами (напр., холерная или брюшнотифозная моновакцины). Дивакцины - препараты для иммунизации против двух инфекций (напр., против тифа и паратифа В). Большое значение имеет разработка препаратов, предназначенных для одновременной вакцинации против нескольких инфекционных болезней. Такие препараты, называемые ассоциированными В., очень облегчают организацию профилактических прививок в противоэпидемической практике. Примером ассоциированной вакцины может служить вакцина АКДС, в состав к-рой входит антиген коклюшного микроба, столбнячный и дифтерийный анатоксины. При правильном сочетании компонентов ассоциированных В. они способны создавать иммунитет в отношении каждой инфекции, практически не уступающей иммунитету, получаемому в результате применения отдельных моновакцин. В иммунологической практике применяется также термин «поливалентные» В., когда препарат предназначен для прививок против одной инфекции, но включает несколько разновидностей (серологических типов) возбудителя, напр, поливалентные В. против гриппа или против лептоспирозов. В отличие от применения ассоциированных В. в форме единого препарата, принято называть комбинированной вакцинацией введение нескольких В. одновременно, но в разные участки тела вакцинируемого.
С целью повышения иммуногенности В., особенно химических и анатоксинов, их применяют в форме препаратов, адсорбированных на минеральных коллоидах, чаще всего на геле гидроокиси алюминия или фосфата алюминия. Применение адсорбированных В. удлиняет период воздействия антигенов (см.) на организм привитого; кроме того, адсорбенты проявляют неспецифическое стимулирующее действие на иммуногенез (см. Адъюванты). Адсорбирование некоторых химических В. (напр., брюшнотифозной) способствует снижению их высокой реактогенности.
Каждый из указанных выше видов В. имеет свои особенности, положительные и отрицательные свойства.
Живые вакцины
Для приготовления живых В. применяют наследственно измененные штаммы (мутанты) патогенных микробов, лишенные способности вызывать специфическое заболевание у вакцинируемого, но сохранившие свойство размножаться в привитом организме, заселять в большей или меньшей степени лимф, аппарат и внутренние органы, вызывая скрытый, без клинического заболевания, инфекционный процесс - вакцинную инфекцию. Привитой организм может реагировать на вакцинную инфекцию местным воспалительным процессом (преимущественно при накожном способе вакцинации против оспы, туляремии и других инфекций), а иногда и общей непродолжительной температурной реакцией. Некоторые реактивные явления при этом могут быть обнаружены при лабораторных исследованиях крови привитых. Вакцинная инфекция, даже если она протекает без видимых проявлений, влечет за собой общую перестройку реактивности организма, выражающуюся в выработке специфического иммунитета против заболевания, вызываемого патогенными формами того же вида микроба.
Выраженность и продолжительность поствакцинального иммунитета различны и зависят не только от качества живой вакцины, но и от иммунологических особенностей отдельных инфекционных болезней. Так, напр., оспа, туляремия, желтая лихорадка ведут к развитию практически пожизненной невосприимчивости у переболевших. В соответствии с этим высокими иммунизирующими свойствами обладают и живые В. против названных болезней. В отличие от этого, трудно рассчитывать на получение высокоиммуногенных В., напр, против гриппа или дизентерии, когда сами эти заболевания не создают достаточно длительного и напряженного постинфекционного иммунитета.
Среди других видов вакцинных препаратов живые В. способны создавать у привитых наиболее выраженный поствакцинальный иммунитет, приближающийся по напряженности к постинфекционному иммунитету, но продолжительность его все же меньше. Напр., высокоэффективные В. против оспы и туляремии способны обеспечить устойчивость привитого человека против заражения на протяжении 5-7 лет, но не пожизненно. После прививок против гриппа лучшими образцами живых В. выраженный иммунитет сохраняется в ближайшие 6-8 мес.; постинфекционный иммунитет против гриппа резко падает к полутора - двум годам после болезни.
Вакцинные штаммы для приготовления живых В. получают различными путями. Э. Дженнер отобрал для вакцинации против оспы людей субстрат, содержащий вирус коровьей оспы, обладающий полным антигенным сходством с вирусом оспы человека, но маловирулентный для людей. Подобным образом отобран бруцеллезный вакцинный штамм № 19, относящийся к слабопатогенному виду Br. abortus, вызывающий бессимптомную инфекцию у привитых с последующим развитием иммунитета ко всем видам бруцелл, в т. ч. и к наиболее опасному для человека виду Br. melitensis. Однако отбор гетерогенных штаммов относительно редко позволяет найти вакцинные штаммы нужного качества. Чаще приходится прибегать к экспериментальному изменению свойств патогенных микробов, добиваясь лишения их патогенности для человека или вакцинируемых домашних животных при сохранении иммуногенности, связанной с антигенной полноценностью вакцинного штамма и с его способностью размножаться в привитом организме и вызывать бессимптомную вакцинную инфекцию.
Методы направленного изменения биол, свойств микробов для получения вакцинных штаммов разнообразны, но общей чертой этих методов является более или менее длительное культивирование возбудителя вне организма животного, чувствительного к данной инфекции. Для ускорения процесса изменчивости экспериментаторы применяют те или иные воздействия на культуры микробов. Так, Л. Пастер и Л. С. Ценковский для получения сибиреяз венных вакцинных штаммов культивировали возбудителя в питательной среде при повышенной против оптимума температуре;
А. Кальметт и Герен (С. Guerin) длительно, в течение 13 лет, культивировали туберкулезную палочку в среде с желчью, в результате чего получили всемирно известный вакцинный штамм БЦЖ (см.). Подобный прием длительного культивирования в неблагоприятных условиях среды применил Н. А. Гайский для получения высокоиммуногенного вакцинного туляремийного штамма. Иногда лабораторные культуры патогенных микробов утрачивают свою патогенность «спонтанно», т. е. под влиянием причин, которые не учитываются экспериментатором. Так был получен чумной вакцинный штамм EV [Жирар и Робик (G. Girard, J. Robie)], бруцеллезный вакцинный штамм № 19 [Коттон и Букк (W. Cotton, J. Buck)], слабореактогенный вариант этого штамма № 19 В А (П. А. Вершилова), применяемый в СССР для вакцинации людей.
Спонтанной утрате патогенности микробных культур предшествует появление в их популяции отдельных мутантов с качеством вакцинных штаммов. Поэтому вполне оправдан и перспективен метод селекции вакцинных клонов из лабораторных культур возбудителей, популяции которых в целом еще сохраняют патогенность. Такая селекция позволила H. Н. Гинсбургу получить сибиреязвенный вакцинный штамм - мутант СТИ-1, пригодный для вакцинации не только животных, но и людей. Аналогичный вакцинный штамм № 3 был получен А. Л. Тамариным, а Р. А. Салтыков селекционировал из патогенной культуры возбудителя туляремии вакцинный штамм № 53.
Вакцинные штаммы, полученные любым методом, должны быть апатогенны, т. е. неспособны вызывать специфическое инфекционное заболевание, в отношении человека и домашних животных, подвергающихся профилактической вакцинации. Но такие штаммы могут сохранять в той или иной мере ослабленную вирулентность (см.) для мелких лабораторных животных. Напр., апатогенные для человека туляремийные и сибиреязвенные вакцинные штаммы проявляют ослабленную вирулентность при введении белым мышам; часть животных, привитых массивными дозами живой вакцины, погибает. Это свойство живых В. не вполне удачно принято называть «остаточной вирулентностью». С наличием ее нередко связана и иммунологическая активность вакцинного штамма.
Для получения вакцинных штаммов вирусов применяется длительное пассирование их в организме одного и того же вида животных, иногда не являющихся естественными хозяевами данного вируса. Так, антирабическая вакцина готовится из штамма фиксированного вируса (virus fixe) Л. Пастера, полученного из вируса уличного бешенства, многократно пассированного через мозг кролика (см. Антирабические прививки). В результате этого резко возросла вирулентность вируса для кролика и снизилась вирулентность для других животных, а также для человека. Таким же путем вирус желтой лихорадки был превращен в вакцинный штамм путем длительных внутримозговых пассажей на мышах (штаммы Дакар и 17Д).
Заражение животных в течение длительного периода оставалось единственным методом культивирования вирусов. Это имело место до разработки новых методов их культивирования. Одним из таких методов явился метод культивирования вирусов на куриных эмбрионах. Использование данного метода позволило адаптировать к куриным эмбрионам высокоаттенуированный штамм 17Д вируса желтой лихорадки и начать широкое изготовление В. против этого заболевания. Метод культивирования на куриных эмбрионах позволил также получать вакцинные штаммы вирусов гриппа, паротита и других вирусов, патогенных для человека и животных.
Еще более существенные достижения в деле получения вакцинных штаммов вирусов стали возможны после открытия Эндерса, Уэллера и Роббинса (J. Enders, Т. Weller, F. Robbins, 1949), предложивших выращивать вирус полиомиелита в тканевых культурах, и введения в вирусологию однослойных клеточных культур и метода бляшек [Дульбекко и Фогт (R. Dulbecco, М. Vogt, 1954)]. Эти открытия позволили осуществить селекцию вариантов вирусов и получать чистые клоны - потомства одной или немногих вирусных частиц, обладающих определенными, наследственно закрепленными биол, свойствами. Сейбину (A. Sabin, 1954), использовавшему указанные методы, удалось получить мутанты вируса полиомиелита, характеризующиеся пониженной вирулентностью, и вывести вакцинные штаммы, пригодные для массового производства живой полиомиелитной вакцины. В 1954 г. те же методы были использованы для культивирования вируса кори, для получения вакцинного штамма этого вируса и затем для производства живой коревой В.
Метод клеточных культур с успехом используется как для получения новых вакцинных штаммов различных вирусов, так и для усовершенствования существующих.
Еще одним методом получения вакцинных штаммов вирусов является метод, основанный на применении рекомбинации (генетического скрещивания).
Так, напр., оказалось возможным получить рекомбинант, используемый как вакцинный штамм вируса гриппа А при взаимодействии авирулентного мутанта вируса гриппа, содержащего гемагглютинин H2 и нейраминидазу N2, и вирулентного штамма Гонконг, содержащего гемагглютинин H3 и нейраминидазу N2. Полученный рекомбинант содержал гемагглютинин H3 вирулентного вируса Гонконг и сохранил авирулентность мутанта.
Живые бактерийные, вирусные и риккетсиозные В. в последние 20- 25 лет наиболее широко изучаются и внедрены в противоэпидемическую практику в Советском Союзе. Применяются в практике живые В. против туберкулеза, бруцеллеза, туляремии, сибирской язвы, чумы, оспы, полиомиелита, кори, желтой лихорадки, гриппа, клещевого энцефалита, Ку-лихорадки, сыпного тифа. Изучаются живые В. против дизентерии, эпидемического паротита, холеры, брюшного тифа и некоторых других инфекционных болезней.
Методы применения живых В. разнообразны: подкожный (большинство В.), накожный или внутрикожный (В. против оспы, туляремии, чумы, бруцеллеза, сибирской язвы, БЦЖ), интраназальный (вакцина против гриппа); ингаляционный (вакцина против чумы); оральный или энтеральный (вакцина против полиомиелита, в стадии разработки - против дизентерии, брюшного тифа, чумы, некоторых вирусных инфекций). Живые В. при первичной иммунизации вводят однократно, за исключением В. против полиомиелита, где повторная вакцинация связана с введением вакцинных штаммов разных типов. В последние годы все шире изучается метод массовой вакцинации с помощью безыгольных (струйных) инъекторов (см. Инъектор безыгольный).
Основной ценностью живых В. является их высокая иммуногенность. При ряде инфекций, в первую очередь особо опасных (оспа, желтая лихорадка, чума, туляремия), живые В. являются единственным эффективным видом В., т. к. убитыми микробными телами или химическими В. не удается воспроизвести достаточно напряженного иммунитета против этих заболеваний. Реактогенность живых В. в целом не превышает реактогенности других прививочных препаратов. За время многолетнего широкого применения живых В. в СССР не наблюдалось случаев реверсии вирулентных свойств апробированных вакцинных штаммов.
К числу положительных качеств живых В. относятся также однократность их применения и возможность использования разнообразных способов аппликации.
К недостаткам живых В. следует отнести их относительно малую устойчивость при нарушении режима хранения. Эффективность живых В. определяется наличием в них живых вакцинных микробов, а естественное отмирание последних снижает активность В. Однако выпускаемые сухие живые В. при соблюдении температурного режима их хранения (не выше 8°) по срокам годности практически не уступают другим видам В. Недостатком некоторых живых В. (оспенная В., антирабическая) является возможность появления у отдельных привитых индивидуумов неврологических осложнений (см. Поствакцинальные осложнения). Эти поствакцинальные осложнения весьма редки, и их удается в значительной мере избежать при строгом соблюдении технологии приготовления и правил применения названных В.
Убитые вакцины
Убитые В. получают инактивацией патогенных бактерий и вирусов, применяя для этого различные воздействия на культуры физ. или хим. характера. Соответственно фактору, обеспечивающему инактивацию живых микробов, готовят гретые В., формалиновые, ацетоновые, спиртовые, феноловые. Изучаются также другие способы инактивации, напр, ультрафиолетовыми лучами, гамма-излучением, воздействием перекиси водорода и другими хим. агентами. Для получения убитых В. применяют высокопатогенные, полноценные в антигенном отношении штаммы соответствующих видов возбудителей.
По своей эффективности убитые В., как правило, уступают живым, однако некоторые из них имеют достаточно высокую иммуногенность, предохраняя привитых от заболевания или уменьшая тяжесть течения последнего.
Т. к. инактивация микробов упомянутыми выше воздействиями нередко сопровождается значительным снижением иммуногенности В. в связи с денатурацией антигенов, предпринимались многочисленные попытки применения щадящих способов инактивации с прогреванием микробных культур в присутствии сахарозы, молока, коллоидных сред. Однако полученные такими способами АД-вакцины, гала-вакцины и др., не показав существенных преимуществ, не вошли в практику.
В отличие от живых В., большинство которых применяется путем однократной прививки, убитые В. требуют двух или трех прививок. Так, напр., убитую брюшнотифозную В. вводят подкожно дважды с интервалом 25- 30 дней и третью, ревакцинирующую, инъекцию проводят через 6-9 мес. Вакцинацию против коклюша убитой В. проводят трехкратно, внутримышечно, с интервалом 30- 40 дней. Холерную В. вводят дважды.
В СССР применяют убитые В. против брюшного тифа и паратифа В, против холеры, коклюша, лептоспирозов и клещевого энцефалита. В зарубежной практике применяют также убитые В. против гриппа, полиомиелита.
Основным способом введения убитых В. являются подкожные или внутримышечные инъекции препарата. Изучаются методы энтеральной вакцинации против брюшного тифа и холеры.
Преимуществом убитых В. является относительная простота их приготовления, поскольку для этого не требуются специально и длительно изученные вакцинные штаммы, а также сравнительно большая стабильность при хранении. Существенным недостатком этих препаратов является слабая иммуногенность, необходимость повторных инъекций в курсе вакцинации, ограниченность способов аппликации В.
Химические вакцины
Химические В., применяемые для профилактики инфекционных болезней, не вполне соответствуют своему принятому в практике названию, т. к. не являются каким-либо химически определенным веществом. Эти препараты представляют собой антигены или группы антигенов, извлеченные из микробных культур тем или иным способом и в той или иной степени очищенные от балластных неиммунизирующих веществ. В одних случаях извлеченные антигены являются в основном бактерийными эндотоксинами (брюшнотифозная хим. В.), получаемыми обработкой культур способами, сходными с методом получения так наз. полных антигенов Буавена. Другие химические В. представляют собой «протективные антигены», продуцируемые нек-рыми микробами в процессе жизнедеятельности в организме животных или в специальных питательных средах при соответствующих режимах культивирования (напр., протективный антиген сибиреязвенных бацилл).
Из числа химических В. в СССР применяется брюшнотифозная В. в сочетании с хим. паратифозной В вакциной или со столбнячным анатоксином. Для вакцинации детских контингентов применяют другую хим. вакцину - Vi-антиген брюшнотифозных микробов (см. Vi-антиген).
В зарубежной практике имеет ограниченное применение для иммунизации некоторых профессиональных контингентов хим. сибиреязвенная В., представляющая собой протективный антиген сибиреязвенных бацилл, получаемый в специальных условиях культивирования и сорбированный на геле гидроокиси алюминия. Двукратное введение этой В. создает у привитых иммунитет длительностью 6-7 мес. Повторные ревакцинации приводят к выраженным аллергическим реакциям на прививки.
Применяют перечисленные В. для профилактики, т. е. для иммунизации здоровых людей с целью выработки ими иммунитета против того или иного заболевания (см. табл.). Некоторые В. применяют также при терапии хрон, инфекционных болезней с целью стимуляции выработки организмом более выраженного специфического иммунитета (см. Вакцинотерапия). Напр., при лечении хрон, бруцеллеза применяют убитую В. (в отличие от живой профилактической В.). М. С. Маргулис, в. д. Соловьев и А. К. Шубладзе предложили лечебную В. против множественного (рассеянного) склероза. Промежуточное положение между профилактическими и лечебными В. занимает антирабическая В., которую применяют для предупреждения заболевания бешенством лиц, зараженных и находящихся в инкубационном периоде. С лечебной целью применяют также аутовакцину (см.), приготовляемую путем инактивации культур микробов, выделенных от больного.
|
Исходный материал, принципы изготовления |
Способ применения |
Эффективность |
Реактогенность |
||
|---|---|---|---|---|---|
|
русское название |
латинское название |
||||
|
Сухая антирабическая вакцина типа Ферми |
Vaccinum antirabicum siccum Fermi |
Фиксированный вирус бешенства, штамм «Москва», пассированный в мозге барана и инактивированный фенолом |
Подкожно |
Эффективна |
Умеренно реактогенна |
|
Инактивированная культуральная антирабическая вакцина Института полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР, сухая |
Vaccinum antirabicum inactivatum culturale |
Фиксированный вирус бешенства, штамм «Внуково-32», выращенный на первичной культуре ткани почек сирийского хомяка, инактивированный фенолом или ультрафиолетом |
Подкожно |
Эффективна |
Слабо реактогенна |
|
Бруцеллезная живая сухая вакцина |
Vaccinum brucellicum vivum (siccum) |
Агаровая культура вакцинного штамма Br. abortus 19-ВА, подвергнутая лиофилизации в сахарозожелатиновой среде |
Эффективна |
Слабо реактогенна |
|
|
Брюшнотифозная спиртовая вакцина, обогащенная Vi-антигеном |
Vaccinum typhosum spirituosum dodatum Vi-antigenum S.typhi |
Бульонная культура штамма Ту2 4446, убитая, обогащенная Vi-ан-тигсном |
Подкожно |
Эффективна |
Умеренно реактогенна |
|
Химическая сорбированная тифозно-паратифозно-столбнячная вакцина (TABte), жидкая |
Vaccinum typhoso-paratyphoso tetanicum chemicum adsorptum |
Смесь полных антигенов бульонных культур возбудителей брюшного тифа и паратифов А и В с фильтратом бульонной культуры С1, tetani, обезвреженной формалином и теплом |
Подкожно |
Эффективна |
Умеренно реактогенна |
|
Живая гриппозная вакцина для интраназального применения, сухая |
Vaccinum gripposum vivum |
Аттенуированные вакцинные штаммы вируса гриппа А2, В, выращенные в куриных эмбрионах |
Интраназально |
Умеренно эффективна |
Слабо реактогенна |
|
Живая гриппозная вакцина для перорального введения, сухая |
Vaccinum gripposum vivum perorale |
Аттенуированные вакцинные штаммы вируса гриппа А2, В, выращенные на культуре клеток почек куриных эмбрионов |
Перорально |
Умеренно эффективна |
Ареактогенна |
|
Очищенный дифтерийный анатоксин, адсорбированный на гидроокиси алюминия (АД-анатоксин) |
Anatoxinum diphthericum purificatum aluminii hydroxydo adsorptum |
Фильтрат бульонной культуры Corynebacterium diphtheriae PW-8, обезвреженный формалином и теплом и сорбированный на гидроокиси алюминия |
Подкожно |
Высокоэффективен |
Слабо реактогенен |
|
Очищенный дифтерийностолбнячный анатоксин, адсорбированный на гидроокиси алюминия (АДС-анатоксин) |
Anatoxinum diphthericotetanicum (purificatum aluminii hydroxydo adsorptum) |
Фильтрат бульонных культур Corynebacterium diphtheriae PW-8 и С1, tetani, обезвреженный формалином и теплом и сорбированный на гидроокиси алюминия |
Подкожно |
Высокоэффективен |
Слабо реактогенен |
|
Адсорбированная коклюшно-дифтерийностолбнячная вакцина (АКДС-вакцина) |
Vaccinum pertussico-diphthericotetanicum aluminii hydroxydo adsorptum |
Смесь культур не менее 3 коклюшных штаммов основных серотипов, убитых формалином или мертиолятом, и фильтратов бульонных культур Corynebacterium diphtheriae PW-8, и Cl. tetani, обезвреженных формалином |
Подкожно или внутримышечно |
Высокоэффективна в отношении дифтерии и столбняка, эффективна в отношении коклюша |
Умеренно реактогенна |
|
Вакцина коревая живая, сухая |
Vaccinum morbillorum vivum |
Аттенуированный вакцинный штамм «Ленинград-16», выращенный на культуре клеток почек новорожденных морских свинок (ПМС) или культуре клеток эмбрионов японских перепелок (ФЭП) |
Подкожно или внутрикожно |
Высокоэффективна |
Умеренно реактогенна |
|
Инактивированная культуральная вакцина против клещевого энцефалита человека, жидкая или сухая |
Vaccinum culturale inactivatum contra encephalitidem ixodicam hominis |
Штаммы «Пан» и «Софьин», культивируемые на клетках куриных эмбрионов и инактивированные формалином |
Подкожно |
Эффективна |
Слабо реактогенна |
|
Лептоспирозная вакцина, жидкая |
Vaccinum leptospirosum |
Культуры не менее 4 серотипов патогенных лептоспир, выращенные на диет, воде с добавлением сыворотки кролика и убитые нагреванием |
Подкожно |
Эффективна |
Умеренно реактогенна |
|
Оспенная вакцина, сухая |
Vaccinum variolae |
Аттенуированные штаммы Б-51, Л-ИВП, ЭМ-63, культивируемые на коже телят |
Накожно и внутрикожно |
Высокоэффективна |
Умеренно реактогенна |
|
Полиомиелитная пероральная живая вакцина типов I, II, III |
Vaccinum poliomyelitidis vivum perorale, typus I, II, III |
Аттенуированные штаммы Сейбина I, II, III типов, культивируемые на первичной культуре клеток почки зеленой мартышки. Вакцина выпускается как в жидкой форме, так и в форме конфет-драже (антиполиодраже) |
Перорально |
Высокоэффективна |
Ареактогенна |
|
Сибиреязвенная живая сухая вакцина (СТИ) |
Vaccinum anthracicum STI (siccum) |
Агаровая споровая культура вакцинного бескапсульного штамма СТИ-1, лиофилизированная без стабилизатора |
Накожно или подкожно |
Эффективна |
Слабо реактогенна |
|
Очищенный столбнячный анатоксин, адсорбированный на гидроокиси алюминия (АС-анатоксин) |
Anatoxinum tetanicum purificatum aluminii hydroxydo adsorptum |
Фильтрат бульонной культуры С1, tetani, обезвреженный формалином и теплом и сорбированный на гидроокиси алюминия |
Подкожно |
Высокоэффективен |
Слабо реактогенен |
|
Анатоксин стафилококковый очищенный адсорбированный |
Anatoxinum staphylococcicum purificatum adsorptum |
Фильтрат бульонной культуры токсигенных штаммов стафилококка 0-15 и ВУД-46, обезвреженный формалином и сорбированный на гидроокиси алюминия |
Подкожно |
Эффективен |
Слабо реактогенен |
|
Сухая живая комбинированная сыпнотифозная вакцина Ε (сухая ЖКСВ-Е) |
Vaccinum combinatum vivum (siccum) E contra typhum exanthematicum |
Смесь аттенуированного вакцинного штамма риккетсий Провацека (Мадрид-Е), культивируемого в желточном мешке куриного эмбриона и растворимого антигена риккетсий Провацека штамма «Брейнль» |
Подкожно |
Эффективна |
Умеренно реактогенна |
|
Туберкулезная сухая вакцина БЦЖ для внутрикожного применения |
Vaccinum BCG ad usum intracutaneum (siccum) |
Культура вакцинного штамма БЦЖ, выращенная на синтетической среде и лиофилизированная |
Внутрикожно |
Высокоэффективна |
Умеренно реактогенна |
|
Холерная вакцина |
Vaccinum cholericum |
Агаровые культуры холерного вибриона и «Эль-Тор», серотипов «Инаба» и «Огава», убитые нагреванием или формалином. Вакцина выпускается в жидком или сухом виде |
Подкожно |
Слабо эффективна |
Умеренно реактогенна |
|
Туляремийная живая сухая вакцина |
Vaccinum tularemicum vivum siccum |
Агаровая культура вакцинного штамма № 15 Гайского линии НИИЭГ, лиофилизированная в Саха розо-желатиновой среде |
Накожно или внутрикожно |
Высокоэффективна |
Слабо реактогенна |
|
Чумная живая сухая вакцина |
Vaccinum pestis vivum siccum |
Агаровая или бульонная культура вакцинного штамма ЕВ линии НИИЭГ, лиофилизированная в сахарозо-желатиновой среде |
Подкожно или накожно |
Эффективна |
Умеренно или слабо реактогенна в зависимости от способа введения |
Методы приготовления
Методы приготовления В. разнообразны и определяются как биол, особенностями микробов и вирусов, из которых готовят В., так и уровнем технической оснащенности вакцинного производства, к-рое все в большей степени приобретает промышленный характер.
Бактерийные В. готовят путем выращивания соответствующих штаммов на различных, специально подобранных, жидких пли плотных (агаровых) питательных средах. Анаэробные микробы - продуценты токсинов, выращиваются в соответствующих условиях. В технологии производства многих бактерийных В. все больше отходят от лабораторных условий культивирования в стеклянных емкостях, используя большого объема реакторы и культиваторы, позволяющие одновременно получать микробную массу на тысячи и десятки тысяч прививочных доз вакцины. В значительной степени механизируются способы концентрации, очистки и другие приемы обработки микробной массы. Все живые бактериальные В. в СССР выпускают в форме лиофилизированных препаратов, высушенных из замороженного состояния в глубоком вакууме.
Риккетсиозные живые В. против Ку-лихорадки и сыпного тифа получают путем культивирования соответствующих вакцинных штаммов в развивающихся куриных эмбрионах с последующей обработкой полученных взвесей желточных мешков и лиофилизацией препарата.
Вирусные вакцины готовятся при использовании следующих методов: Производство вирусных вакцин на первичных клеточных культурах почечной ткани животных. В различных странах используют для производства вирусных В. культуры трипсинизированных почечных клеток обезьян (полиомиелитные В.), морских свинок и собак (В. против кори, краснухи и некоторых других вирусных инфекций), сирийских хомяков (антирабическая В.).
Производство вирусных вакцин на субстратах птичьего происхождения. На производстве ряда вирусных В. успешно используются куриные эмбрионы и их клеточные культуры. Так, на куриных эмбрионах или в клеточных культурах куриных эмбрионов готовят В. против гриппа, паротита, оспы, желтой лихорадки, кори, краснули, клещевого и японского энцефалитов и другие В., используемые в ветеринарной практике. Для производства некоторых вирусных В. пригодны также эмбрионы и тканевые культуры иных птиц (напр., перепелок и уток).
Производство вирусных вакцин на животных. Примерами являются производство оспенной В. (на телятах) и производство антирабической В. (на овцах и сосунках белых крыс).
Производство вирусных вакцин на диплоидных клетках человека. В ряде стран на производстве вирусных В. (против полиомиелита, кори, краснухи, оспы, бешенства и некоторых других вирусных инфекций) применяется штамм WI-38 диплоидных клеток, полученных из легочной ткани эмбриона человека. Основными преимуществами использования диплоидных клеток являются: 1) широкий спектр чувствительности этих клеток к различным вирусам; 2) экономичность производства вирусных В.; 3) отсутствие в них посторонних побочных вирусов и других микроорганизмов; 4) стандартность и стабильность клеточных линий.
Усилия исследователей направлены на выведение новых штаммов диплоидных клеток, в т. ч. пропс-ходящих из тканей животных, с целью дальнейшей разработки и внедрения в широкую практику доступных, безопасных и экономичных методов производства вирусных В.
Следует особо подчеркнуть, что любая В., предложенная для широкого применения, должна удовлетворять требованиям к частоте и тяжести побочных реакций и осложнений, связанных с вакцинацией. Важность этих требований признается ВОЗ, к-рая проводит совещания экспертов, формулирующих все требования к биол, препаратам и подчеркивающих, что безопасность препарата - главное условие при разработке В.
Производство В. в СССР сосредоточено преимущественно в крупных ин-тах вакцин и сывороток.
Качество В., выпускаемых в СССР, находится под контролем как местных контрольных органов при институтах-изготовителях. так и Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биол, препаратов им. Л. А. Тарасевича. Технология производства и контроль, а также методы применения В. регламентируются Комитетом вакцин и сывороток М3 СССР. Большое внимание уделяется стандартизации выпускаемых для практического применения В.
Вновь разрабатываемые и предлагаемые для практики В. проходят разностороннюю апробацию в Государственном институте им. Тарасевича, материалы испытаний рассматриваются Комитетом вакцин и сывороток, а при внедрении новых В. в практику соответствующая документация на них утверждается М3 СССР.
Помимо разностороннего изучения новых В. в экспериментах на животных, после установления безвредности препарата его изучают в отношении реактогенности и иммунологической эффективности в ограниченном опыте иммунизации людей. Иммунологическую эффективность В. оценивают по серологическим изменениям и кожным аллергическим пробам, наступающим у привитых людей в определенные сроки наблюдений. Следует, однако, учитывать, что эти показатели далеко не во всех случаях могут служить критериями действительной иммуногенности В., т. е. ее способности защитить привитого от заболевания соответствующей инфекционной болезнью. Поэтому глубокому и тщательному изучению подлежат коррелятивные связи между серо-аллергическими показателями у вакцинированных и наличием действительного поствакцинального иммунитета, выявляемого в опытах на животных. В создании отечественных оригинальных В. большое значение имели работы М. А. Морозова, Л. А. Тарасевича, H. Н. Гинсбурга, Н.Н. Жукова-Вережникова, Н. А. Гайского и Б. Я. Эльберта, П. А. Вершиловой, П. Ф. Здродовского, А. А. Смородинцева, В. Д. Соловьева, М. П. Чумакова, О. Г. Анджапаридзе и др.
Библиография: Безденежных И. С. и др. Практическая иммунология, М., 1969; Гинсбург H. Н. Живые вакцины (История, элементы теории, практика), М., 1969; Здродовский П. Ф. Проблемы инфекции, иммунитета и аллергии, М., 1969, библиогр.; Кравченко А. Т., Салтыков Р. А. и Резепов Ф. Ф. Практическое руководство по применению биологических препаратов, М., 1968, библиогр.; Методическое руководство по лабораторной оценке качества бактерийных и вирусных препаратов (Вакцины, анатоксины, сыворотки, бактериофаги и аллергены), под ред. С. Г. Дзагурова и др., М., 1972; Профилактика инфекций живыми вакцинами, под ред. М. И. Соколова, М., 1960, библиогр.; Рогозин И. И. и Беляков В. Д. Ассоциированная иммунизация и экстренная профилактика, Д., 1968, библиогр.
В. М. Жданов, С. Г. Дзагуров, Р. А. Салтыков.